関節リウマチにおける破骨細胞の炎症性変化に関する研究－骨破壊の制御を目指して－

类风湿性关节炎中破骨细胞炎症变化的研究 - 旨在控制骨质破坏 -

• 批准号: 14J06672
• 负责人: 野間 成人
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-25 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J06672/
• 关键词: 破骨細胞; 関節リウマチ; 炎症

転写因子NF-κBは、さまざまな免疫過程および細胞過程において重要な役割を担っており、その調節異常はがんおよび炎症性病態の主要な誘因であり、NF-κB構成因子であるp50/p52の2重欠損マウスは大理石骨病を呈することが報告され、NF-κBが破骨細胞分化を制御することで、骨疾患の病態形成に大きく関与することが示されている。RANKLまたは炎症性サイトカイン刺激の時間経過とともに活性化するNF-κB構成因子が変化していることがわかった。つづいて、関節リウマチにおける破骨細胞の分化を制御する因子の探索を行った。1年目の研究で見出すことに成功しており、破骨細胞分化過程において活性化しているNF-κB構成因子との関連性の高い因子についてピックアップし、siRNAを用いたノックダウン実験を行った。種々のsiRNAをトランスフェクトした骨髄由来マクロファージ（BMM）を50 ng/ml RANKLで3-4日間培養することで破骨細胞へと分化させ、TRAP染色、qPCRによる破骨細胞分化マーカーの発現解析を行うことで、RNAiにより種々のタンパク質をノックダウンした際の破骨細胞分化を検討することで、破骨細胞分化に影響するタンパク質の同定を行う。ノックダウン効率の確認にはRT‐PCR法を用いた。破骨細胞分化誘導刺激後、TRAP染色にて破骨細胞を染色すると、ある因子のノックダウンにより、破骨細胞数が減少することがわかった。さらに、同定した因子が破骨細胞分化に関わることを詳細に調べるため、ゲノム編集により、同定した因子のノックアウトES細胞を作製し、ES細胞から破骨細胞分化誘導系を確立した。同定した因子のノックアウトES細胞に破骨細胞分化誘導刺激を行ったところ、wild-type ES細胞から誘導される破骨細胞に比べ、分化した破骨細胞数が減少していることを見出した。

NF-κB plays an important role in immune and cellular processes, and its dysregulation is a major cause of inflammatory pathologies. NF-κB components are reported to be p50/p52 deficient in marble bone disease, NF-κB inhibits osteoclast differentiation, and bone disease pathologies. RANKL is activated in response to inflammatory stimuli. Exploration of factors that control osteoclast differentiation in the middle and joint One year of targeted research has shown that this success has been achieved, and the use of siRNA has been implemented in the activation of NF-κB components and related high-level factors during osteoclast differentiation. The expression of siRNA in osteoclast cells was determined by DNA sequencing, TRAP staining, qPCR and DNA sequencing. The expression of siRNA in osteoclast cells was determined by DNA sequencing. The method of RT-PCR was used to confirm the detection rate. After osteoclast differentiation induction stimulation, TRAP staining and osteoclast staining, the number of osteoclasts decreased To establish an induction system for ES cell differentiation by regulating the expression of osteoclast differentiation factors. The same factor was used to induce osteoclast differentiation in ES cells, and the number of osteoclasts induced in wild-type ES cells decreased.

项目成果

The role of a new RANK-binding protein in macrophage-to-osteoclast differentiation

一种新的 RANK 结合蛋白在巨噬细胞向破骨细胞分化中的作用

• 发表时间: 2016
• 作者: Saori Ohmae;Naruto Noma;Hiroaki Fuji;Tomoko Fujita;Keiko Iwaisako;Nagahiro Minato;Masaki Hikida;Masataka Asagiri
• 通讯作者: Masataka Asagiri

Reconstruction of the hepatic artery in mouse liver transplantation: impact on patterns of immunologic tolerance

小鼠肝移植中肝动脉的重建：对免疫耐受模式的影响

• 发表时间: 2016
• 作者: Keiko Iwaisako;et al.
• 通讯作者: et al.

薬剤性劇症肝炎の病態形成における制御性壊死の関与

控制性坏死参与药物性暴发性肝炎的发病机制

• 发表时间: 2014
• 作者: 大前沙織;竹入雅敏;野間成人他;竹本 研史，波多野悦朗，祝迫 惠子，竹入 雅敏，野間 成人，鳥口 寛，田邉 和孝，瀬尾 智，田浦康二朗，朝霧 成挙，上本 伸二
• 通讯作者: 竹本 研史，波多野悦朗，祝迫 惠子，竹入 雅敏，野間 成人，鳥口 寛，田邉 和孝，瀬尾 智，田浦康二朗，朝霧 成挙，上本 伸二

Necrostatin-1 protects against reactive oxygen species (ROS)-induced hepatotoxicity in acetaminophen-induced acute liver failure.

• DOI: 10.1016/j.fob.2014.08.007
• 发表时间: 2014
• 期刊: FEBS OPEN BIO
• 影响因子: 2.6
• 作者: Takemoto, Kenji;Hatano, Etsuro;Iwaisako, Keiko;Takeiri, Masatoshi;Noma, Naruto;Ohmae, Saori;Toriguchi, Kan;Tanabe, Kazutaka;Tanaka, Hirokazu;Seo, Satoru;Taura, Kojiro;Machida, Keigo;Takeda, Norihiko;Saji, Shigehira;Uemoto, Shinji;Asagiri, Masataka
• 通讯作者: Asagiri, Masataka

破骨細胞の骨吸収における新規制御分子の同定

破骨细胞骨吸收中新型调节分子的鉴定

• 发表时间: 2016
• 作者: 大前沙織;竹入雅敏;野間成人他
• 通讯作者: 野間成人他