低出力レーザーを用いた神経幹細胞の増殖促進とニューロジェネシスに関する研究

本実験では、低出力レーザー照射 (LLI: Low-power laser irradiation)の効果について、マウス由来神経幹/前駆細胞 (NSPCs : Neural Stem/Progenitor Cells) の培養細胞と、大脳新皮質に内在するNSPCsに対する研究を検討した。また、従来のCCAO(Common carotid artery occlusion)の手法に加えて、MCAO(Middle cerebral artery occlusion)による脳梗塞モデルを確立した。MCAOによる細胞種類の検討にはウイルスによる分子生物学的手法を用いて検討した。マウス胎生期(E: Embryonic day)10.5の前脳と、E14.5の基底核隆起から、ニューロスフィアを作成した。波長532 nm (60 mW) の20、40、60分間のLLIを行い、48時間後に細胞増殖率の測定をした。基底核隆起由来では変化がみられず、前脳由来のNSPCsの60分照射のみ有意に細胞増殖が増加した。ウエスタンブロット分析によるAktタンパク質の発現量はLLIによって有意に増加した。CCAOの実験では、脳表面への532 nm LLI行った。LLI後にEdUを投与し、心臓還流固定を行い脳切片を作成した。その結果、細胞増殖期にある抑制性神経前駆体細胞が大脳新皮質第一層に観察された。分裂後に分化へ移行している細胞は大脳新皮質第一層以外にも観察され、その分布はLLIによって深い層へ有意に増加したことから細胞遊走が促進されたことが示唆された。細胞種類の検討には、CMV-mAcGFP-WPREとNG2p-DsRedのプラスミドから作成した偽レトロウイルスを使用した。ウイルスはMCAO部位に感染させた。刺激の豊かな生育環境では通常飼育に比べてGlial Scarの形成範囲が大脳新皮質の上層部では縮小したが、下層部ではMCAOによる病巣部位が観察された。

本実験では、低出力レーザー照射 (LLI: Low-power laser irradiation)の効果について、マウス由来神経幹/前駆細胞 (NSPCs : Neural Stem/Progenitor Cells) の培養細胞と、大脳新皮質に内在するNSPCsに対する研究を検討した。また、従来のCCAO(Common carotid artery occlusion)の手法に加えて、MCAO(Middle cerebral artery occlusion)による脳梗塞モデルを確立した。MCAOによる細胞種類の検討にはウイルスによる分子生物学的手法を用いて検討した。マウス胎生期(E: Embryonic day)10.5の前脳と、E14.5の基底核隆起から、ニューロスフィアを作成した。波長532 nm (60 mW) の20、40、60分間のLLIを行い、48時間後に細胞増殖率の測定をした。基底核隆起由来では変化がみられず、前脳由来のNSPCsの60分照射のみ有意に細胞増殖が増加した。ウエスタンブロット分析によるAktタンパク質の発現量はLLIによって有意に増加した。CCAOの実験では、脳表面への532 nm LLI行った。LLI後にEdUを投与し、心臓還流固定を行い脳切片を作成した。その結果、細胞増殖期にある抑制性神経前駆体細胞が大脳新皮質第一層に観察された。分裂後に分化へ移行している細胞は大脳新皮質第一層以外にも観察され、その分布はLLIによって深い層へ有意に増加したことから細胞遊走が促進されたことが示唆された。細胞種類の検討には、CMV-mAcGFP-WPREとNG2p-DsRedのプラスミドから作成した偽レトロウイルスを使用した。ウイルスはMCAO部位に感染させた。刺激の豊かな生育環境では通常飼育に比べてGlial Scarの形成範囲が大脳新皮質の上層部では縮小したが、下層部ではMCAOによる病巣部位が観察された。