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オプトジェネティクス技術を用いた反芻家畜における卵胞発育制御メカニズムの解明

利用光遗传学技术阐明反刍家畜卵泡发育的控制机制

基本信息

批准号：
14J10480
负责人：
末富祐太
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は「視床下部弓状核KNDyニューロンが卵胞発育を促す性腺刺激ホルモン放出ホルモン（GnRH）パルスの発生中枢である」ことを直接的に証明することを目的とし、神経活動を人為的に制御可能な光感受性イオンチャネルをKNDyニューロン特異的に発現させたシバヤギの作出を目指した。このヤギの作出には、アデノ随伴ウイルス（AAV）ベクターをもちいた遺伝子導入技術とCre recombinase（Cre）を用いた部位特異的な遺伝子組換え技術を組み合わせた。今年度は、シバヤギ弓状核へのAAV注入により、KNDyニューロンでCre発現に依存したタンパク質発現を誘導できるかを評価した。今回の評価では、以下の各々のDNAコンストラクトを含む2種類のAAVを生成した。（１）Cre依存的に発現する赤色蛍光タンパク質（mCherry）のDNAコンストラクト（２）KNDyニューロン特異的にCre発現を誘起するDNAコンストラクト精巣除去成熟雄シバヤギの弓状核に上記の2種類のAAVを注入し、3週間以上飼育した。その後、脳組織を灌流固定し、弓状核を含む脳ブロックを切り出して、凍結切片を作製した。その結果、AAV注入に用いたインジェクターは弓状核ないし弓状核周辺領域に位置しており、インジェクター痕周辺で赤色蛍光が観察された。今後は、切片上で観察された赤色蛍光がmCherryタンパク質由来であるかを確認する必要がある。さらに、KNDyニューロン内の神経ペプチドとmCherryタンパク質の二重染色により、Cre依存的にかつKNDyニューロン特異的にmCherryが発現可能であるかを精査する必要がある。目的のシバヤギ作出後は、KNDyニューロンの人為的操作に対応して、弓状核の神経活動やGnRH/LH分泌が変化するかを解析可能となると考えている。

This study is aimed to provide a direct demonstration of the potential for artificial control of neuroactivity in the development of gonadal stimulation of egg development in the arcuate nucleus of the inferior optic bed. This is the first time that we've had a chance to do this. We're going to use a site-specific gene recombination technique. This year, the AAV injection in the arcuate nucleus was evaluated. This review shows that the following DNA sequences are generated by two different types of AAV. (1) Cre-dependent development of red cherry DNA gene (mCherry);(2) KNDy-specific development of Cre DNA gene;(3) AAV injection of 2 species recorded in the arcuate nucleus of mature males; and (4) incubation for more than 3 weeks. After that, the tissue was perfused and fixed, and the arcuate nucleus was cut and frozen. As a result, AAV injection was used to detect the position of the arcuate nucleus, the red light of the arcuate nucleus and the red light of the arcuate nucleus. From now on, check the red light on the slice to confirm the origin of the cherry In addition, KNDy-specific mCherry may be found in KNDy-specific mCherry, which is necessary for careful investigation. Objective: To investigate the possible analysis of GnRH/LH secretion in the arcuate nucleus after human manipulation.

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

アデノ随伴ウイルス（AAV）ベクターを用いたヤギ神経細胞への遺伝子導入法の検討

利用腺相关病毒（AAV）载体将基因转移到山羊神经细胞的方法研究

DOI：
发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
0
作者：
○Y. Suetomi;F. Matsuda;Y. Uenoyama;H. Tsukamura;K.-I. Maeda;S. Ohkura;○末富祐太，奥田雄大，小林憲太，大蔵　聡，松田二子
通讯作者：
○末富祐太，奥田雄大，小林憲太，大蔵　聡，松田二子

Establishment of a Neuronal Cell Line Derived from KNDy Neuron in a Goat.

山羊 KNDy 神经元衍生的神经元细胞系的建立。