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脳内にｍＲＮＡを送達する高分子ミセルの創製と脳神経系難病の標的治療への展開

创造将 mRNA 输送到大脑的聚合物胶束并开发针对脑神经系统疑难杂症的靶向治疗

基本信息

批准号：
14J10621
负责人：
末吉大輝
金额：
$ 1.79万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

当該年度では、一昨年度より開発を進めている酵素封入PIC型ベシクル（L-アスパラギナーゼ(L-ASP)封入PICsome; L-ASP@PICsome）について、その封入機構の解明およびより広範な応用可能性に向けた検討を行った。1) 封入酵素とPICsomeの構成ポリマーを予め別々の蛍光色素で標識化して調製したL-ASP@PICsomeについて、蛍光相互相関分光法を用いた評価を行ったところ、調製時の酵素濃度の増加に伴い空のPICsomeの形成割合が低下するという傾向が見られた。一方、L-ASP@PICsomeの酵素封入効率についてビシンコニン酸法を用いて定量を行った結果、調製時の酵素濃度の増加に伴い封入効率は低下の傾向を示した。以上の結果から、PICsomeはその可逆的な解離・再生挙動により、系中に存在する酵素分子を確率的に捕捉するが、内水相の限られた空間内に少数の酵素分子を担持しうるという機構が推察された。2) PICsomeの生体内でのさらなる応用可能性を探索するため、血流中以外の流動環境下での利用可能性に着目し、腹腔内投与後の腹腔内での滞留性について検討した。蛍光標識化した粒径約100 nmのPICsome、粒径約30 nmのPICミセル、およびL-ASPについて、各々をマウスに腹腔内投与した後の腹腔内滞留性をin vivo蛍光イメージングシステムを用いて評価した結果、PICsomeはPICミセルやL-ASPに比べ、著しく高い腹腔内滞留性を示した。さらにin vivo共焦点レーザー走査型顕微鏡による観察の結果、腹腔内投与した各製剤の腹腔内からの消失経路は主として血中への移行であることが示唆された。この機構の詳細は未解明であるが、腹腔内におけるPICsomeの長期滞留性は、酵素封入PICsomeの生体内リアクターとしてのより広範な応用可能性を支持するものである。

In the year of the year, and last year, the enzyme was sealed into the PIC type enzyme (L-ASP) sealed into the PICsome; L-ASP@PICsome system, and the sealing mechanism was used to understand the possibility of application. 1) Encapsulation of the enzyme PICsome was used to mark the light pigments in the light pigments, the light was used to label the light pigments, and the photospectrum method was used to determine the temperature, the temperature of the enzyme, the concentration of the enzyme, the On the one hand, the encapsulation rate of L-ASP@PICsome enzyme was determined by quantitative analysis of the results, and the results were analyzed by quantitative analysis, and the results showed that the blocking rate was low. The results of the above results, the reversible isolation and regeneration of PICsome DNA, the capture of the confirmation rate of enzyme molecules in the system, and the detection of a small number of enzymes in the space of internal water phase restriction were carried out by the monitoring agencies. 2) the possibility of the use of PICsome in vivo to explore the possibility of the use of drugs in the blood flow environment, intraperitoneal injection and intraperitoneal injection of residual drugs in the abdominal cavity. The particle size of light labeling was about 100 nm PICsome, the particle size was about 30 nm PIC, the particle size was about 30 nm, the L-ASP was injected intraperitoneally, and the intraperitoneal retention of in vivo was detected by intraperitoneal injection and postoperative. the results were compared with the results of PICsome, PIC and L-ASP, respectively. To observe the results of in vivo confocal microsurgery, intraperitoneal injection and intraperitoneal injection, the route of disappearance in the abdominal cavity showed that there was an abet in the blood. The organization did not understand the disease, the abdominal cavity was tested for long-term retention of PICsome, and the enzyme was sealed into the body of PICsome. The possibility of the use of the enzyme was used to support the diagnosis.