权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

ヒトｉＰＳ細胞由来ニューロンの成熟化を目指した３次元培養技術の開発

开发用于人类iPS细胞源性神经元成熟的三维培养技术

基本信息

批准号：
14J11194
负责人：
小田原あおい
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tohoku Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

アストロサイト共培養法がヒトiPS細胞由来ニューロンの長期培養を可能とし、自発活動を促すことが、昨年度の研究成果より明らかとなった。今年度は、細胞が折り重なる程度の高密度（高さ10μm）でヒトiPS細胞由来ニューロンとアストロサイトを共培養し、長時間にわたる自発活動の特性を調べ、培養時期と成熟化の関係性を見出すことを目的に研究を行った。アストロサイトと共培養することで、これまで難しかった１年以上の長期培養および電気活動の取得に成功した。自発活動の発火頻度に着目して解析を行ったところ、培養日数の経過と共に発火頻度が増加し、培養200日程度まで顕著な増加を示していた。神経ネットワークがシナプス伝播により同時期に活動する同期バースト発火に着目して解析したところ、培養70日目以降で見られ、その後培養増加していた。同期バースト発火は、in vivoでも見られる現象であり、機能的成熟化の指標の１つとなりうる。このような同期バースト発火はRatの神経細胞を用いた場合は培養10日程度で見られることから、ヒトiPS細胞由来ニューロンの機能的な成熟化には時間を有することがわかった。また、薬理試験の結果からも培養200日以上で顕著な各種受容体の応答が得られたことから、ヒトiPS細胞由来ニューロンを用いた薬効評価は培養日数を考慮する必要性が示唆された。次に、３次元培養技術を用いて、ヒトiPS細胞由来ニューロンを培養したところ、厚さ50μm程度の組織モデルを構築することができた。２次元培養と３次元培養による機能的な差異を現在調べている。

The results of the study on the origin and long-term culture of iPS cells are presented in this paper. This year, the high density (up to 10μm) of iPS cells was studied. The origin of iPS cells was studied by co-culture and long-term self-development characteristics. The relationship between culture period and maturity was observed. The success of long-term culture and electrical activity for more than one year was difficult to achieve. The frequency of self-development activity was analyzed, the number of days of incubation was increased, and the frequency of total development was increased. In the same period of time, the activity of the brain was analyzed, and the growth rate was increased after 70 days of cultivation. In the same period, the fire is released, in vivo, the phenomenon is seen, and the maturity of the function is measured. When Rat's neurons are used, they are cultured for 10 days, and the maturation time of iPS cells 'functions is available. The results of the biological test were obtained after culturing for more than 200 days, and the necessity of evaluating the number of days of culture for iPS cells was indicated. Second, the use of three-dimensional culture technology, the origin of iPS cells, culture, thickness of 50μm tissue structure, construction of the same. The difference between 2D culture and 3D culture is now adjusted.