家族性骨髄異形成症候群の原因遺伝子およびその分子機構の解明

阐明家族性骨髓增生异常综合征的致病基因和分子机制

• 批准号: 15J03679
• 负责人: 髙岡 賢輔
• 金额: $ 1.68万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-24 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J03679/
• 关键词: 骨髄異形成症候群; 家族性骨髄異形成症候群

本年度は家族性骨髄異形成症候群（家族性MDS）の原因遺伝子として絞り込んだ12の候補遺伝子のうちHLTFをin vitroの系にて機能解析した。最初にshRNAの系を用いHLTFをノックダウン（KD）したヒト赤白血病細胞株（HEL）を作成した。γH2AXの免疫染色実験により、γH2AX foci≧5の細胞数はコントロールに比し、有意にHLTFをKDした細胞で多く、HLTFをKDしたHELではDNA傷害がより蓄積されていることを明らかにした。次にHELにHLTFを過剰発現し同様の実験を施行した。γH2AX foci≧5の細胞数はコントロールに比し、変異体（MT）を過剰発現した細胞において有意に多いことを明らかにした。HLTF野生型（WT）はユビキチン結合酵素であるUBC13と結合し、増殖細胞核抗原（PCNA）をポリユビキチン化することでerror-free（無謬性）DNA複製後修復の一旦を担うことが報告されている（Proc Natl Acad Sci U S A. 2008 Mar 11;105(10):3768-73）。HEK293T細胞を用いたHLTF過剰発現の系で、HLTF変異体とUBC13の結合がHLTF野生型との結合に比し減弱することが免疫沈降法により明らかとなった。最後にHEK293T細胞を用いたHLTF過剰発現の系を用いて、ポリユビキチン化されたPCNAを免疫沈降法により測定した。HLTF変異体（MT）を過剰発現した細胞では、野生型を過剰発現した細胞に比べ、ポリユビキチン化されたPCNAが減少していることを明らかにした。以上により、家族性MDSにおけるHLTF変異によりPCNAのポリユビキチン化が損なわれ、DNA損傷が蓄積することが示唆された。

This year, the cause of familial skeletal dysplasia syndrome (familial MDS) will be analyzed in vitro. Initially, the shRNA system was produced using the HLTF KD leukemia cell line (HEL). γH2AX immunostaining, γH2AX Foci≧5のcell numberはコントロールに Ratioし、IntentionalにHLTFをKDしたcellsで多く、 HLTFをKDしたHELではDNA damageがより accumulatesされていることを明らかにした. The time is HEL and HLTF is the same as the execution. γH2AX foci≧5のcell numberはコントロールに比し,変variant(MT)をpass剰発appearsしたcellsにおいてmeaningに多いことを明らかにした. HLTF wild type (WT) binding enzyme UBC13 binding enzyme, proliferating cell nuclear antigen (PCNA) binding enzymeキチン化することでerror-free（无 fallacy）DNA post-replication repair のOnce dan うことが report されている (Proc Natl Acad Sci U S A. 2008 Mar 11;105(10):3768-73). HEK293T cells are derived from the HLTF cross-linked gene and the HLTF allogeneic UBC13 The combination of HLTF wild type and binding is weaker than that of immunosedimentation. Finally, the HEK293T cells were tested using HLTF, and the immunosedimentation method was determined using the immunosedimentation method of HTNA, and the immunoprecipitated PCNA. HLTF allogeneic (MT) cells and wild-type cellsに比べ,ポリユビキチン化されたPCNAがreduceしていることを明らかにした. Above, familial MDS, familial MDS, HLTF, different PCNAリユビキチン化が Damageなわれ, DNA damage がAccumulation することがshows instigation された.

项目成果

Nationwide survey of familial myelodysplastic syndromes/acute myeloid leukemia in Japan

日本全国家族性骨髓增生异常综合征/急性髓系白血病调查

• 发表时间: 2016
• 作者: Kensuke Takaoka;Akihide Yoshimi;Junji Koya;Takashi Toya;Takashi Kobayashi;Yasuhito Nannya;Hironori Ueno;Kenshi Suzuki;Hironori Harada;Atsushi Manabe;Yasuhide Hayashi;Mineo Kurokawa
• 通讯作者: Mineo Kurokawa

Nationwide epidemiological survey of familial myelodysplastic syndromes/acute myeloid leukemia

全国家族性骨髓增生异常综合征/急性粒细胞白血病流行病学调查

• 发表时间: 2016
• 作者: Kensuke Takaoka;Akihide Yoshimi;Junji Koya;Takashi Toya;Takashi Kobayashi;Yasuhito Nannya;Hironori Ueno;Hironori Harada;Yasuhide Hayashi;Mineo Kurokawa
• 通讯作者: Mineo Kurokawa

A candidate causal gene of familial myelodysplastic syndromes

家族性骨髓增生异常综合征的候选致病基因

• 发表时间: 2015
• 作者: Takaoka K;Kawazu M;Yoshimi A;Kobayashi T;Nannya Y;Ueno H;Harada H;Hayashi Y;Mano H;and Kurokawa M
• 通讯作者: and Kurokawa M

Investigation of a causal gene of familial myelodysplastic syndromes

家族性骨髓增生异常综合征致病基因的研究

• 发表时间: 2015
• 作者: Takaoka K;Kawazu M;Yoshimi A;Toya T;Kobayashi T;Nannya Y;Ueno H;Suzuk K;Harada H;Manabe A;Hayashi Y;Mano H;Kurokawa M
• 通讯作者: Kurokawa M

Epidemiology of familial myelodysplastic syndromes/acute myeloid leukemia in Japan

日本家族性骨髓增生异常综合征/急性髓系白血病的流行病学

• 发表时间: 2016
• 作者: Kensuke Takaoka;Akihide Yoshimi;Junji Koya;Takashi Kobayashi;Hironori Ueno;Kenshi Suzuki;Hironori Harada;Atsushi Manabe;Yasuhide Hayashi;Mineo Kurokawa
• 通讯作者: Mineo Kurokawa