ポリユビキチン鎖形成により惹起されるシグナル伝達経路ネットワークの解明

阐明多聚泛素链形成触发的信号转导通路网络

• 批准号: 15J03774
• 负责人: 上松 篤史
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-24 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J03774/
• 关键词: NF-κB; cell-free; ヒト２万種タンパク質; ポリユビキチン鎖; ポリユビキチン鎖結合タンパク質; コムギ無細胞タンパク質合成系; NF-κBシグナル; IFNシグナル; シグナル伝達; プロテインアレイ; ユビキチン結合タンパク質; 20K-HUPA

今年度は、初年度のスクリーニングにより見出した複数種類のポリユビキチン鎖結合タンパク質(UBP: Ubiquitin Binding Protein)より、NF-κBシグナルに与えるUBPを選抜し、生化学的な評価及び細胞生物学的解析によりポリユビキチン鎖形成により惹起されるシグナル伝達経路ネットワークの分子メカニズムの評価を行った。【1】UBPのユビキチン鎖特異性の評価：M1-Ub特異的に結合した3種類のUBP(euUBP2、euUBP17、euUBP19)がK48-Ub、K63-Ubにも結合するかを確認するために、当研究室において開発したAGIAタグを付加した3種類のUBPとM1、K48、K63の特異性を免疫沈降法により確認を行った。その結果、euUBP2においてはMono-Ubには結合を示さなかったものの、M1、K48、K63-Ubには全て結合を示すことが明らかとなった。また、euUBP17、euUBP19はMono-Ub及びK48-Ubには結合を示さず、K63、M1-Ub特異的に結合を示す興味深い実験結果を得た。【2】ZFAND2B過剰発現による核内RelAの発現量の解析:NF-κBシグナルの制御が明らかとなったZFAND2BがNF-κBシグナルを抑制することは転写因子NF-κBの構成因子RelAの核タンパク量を細胞分画により解析した。その結果、野生型ZFAND2Bの過剰発現では核内のRelA量が減少していることを見出した。また、MT3変異体ではコントロールであるMOCKと変化が見られなかった(図3)。これらの結果はLuciferase Assayの結果と一致しており、２万種スクリーニングにより見出したZFAND2Bが直鎖状ポリユビキチン鎖と結合することでNF-κBシグナルを抑制することを新規に見出した。

This year, the first year of the year, a number of types of Ubiquitin Binding Protein (UBP), NF-κB, UBP, biochemical evaluation and analysis of cell biology have been identified. [1] Evaluation of UBP specificity: M1-Ub-specific binding to three kinds of UBP(euUBP2, euUBP17, euUBP19), K48-Ub, K63-Ub binding to confirm, when the laboratory was opened to develop AGIA, increase the specificity of three kinds of UBP M1, K48, K63 to confirm. As a result, euUBP2 has a mono-Ub combination, M1, K48 and K63-Ub. The binding of Mono-Ub and K48-Ub to euUBP 17 and euUBP19 was shown, and the binding of K63 and M1-Ub to euUBP 19 was shown. [2] Analysis of the expression of nuclear RelA in ZFAND2B:NF-κB regulation and inhibition of ZFAND2B: NF-κB constituent factor nuclear RelA analysis of cell differentiation As a result, wild-type ZFAND2B was found to have decreased levels of RelA in the nucleus. MT3 is a different kind of MOCK. The results of Luciferase Assay were consistent with those of the 20,000-species Luciferase Assay. ZFAND2B was found to be directly linked to NF-κB.

项目成果

AGIA Tag System Based on a High Affinity Rabbit Monoclonal Antibody against Human Dopamine Receptor D1 for Protein Analysis.

• DOI: 10.1371/journal.pone.0156716
• 发表时间: 2016
• 期刊: PloS one
• 影响因子: 3.7
• 作者: Yano T;Takeda H;Uematsu A;Yamanaka S;Nomura S;Nemoto K;Iwasaki T;Takahashi H;Sawasaki T
• 通讯作者: Sawasaki T

Establishment of a Wheat Cell-Free Synthesized Protein Array Containing 250 Human and Mouse E3 Ubiquitin Ligases to Identify Novel Interaction between E3 Ligases and Substrate Proteins.

建立一个无小麦细胞的合成蛋白阵列，其中包含250个人和小鼠E3泛素连接酶，以鉴定E3连接酶与底物蛋白之间的新型相互作用。

• DOI: 10.1371/journal.pone.0156718
• 发表时间: 2016
• 期刊: PloS one
• 影响因子: 3.7
• 作者: Takahashi H;Uematsu A;Yamanaka S;Imamura M;Nakajima T;Doi K;Yasuoka S;Takahashi C;Takeda H;Sawasaki T
• 通讯作者: Sawasaki T

Identification of an oncogene E3 ligase for deubiquitinating enzyme CYLD

去泛素化酶 CYLD 的癌基因 E3 连接酶的鉴定

• 发表时间: 2015
• 作者: Atsushi Uematsu;Hirotaka Takahashi;Hiroyuki Takeda;Fuminori Tokunaga;Roppei Yamada;Yohei Miyagi;Tatsuya Sawasaki
• 通讯作者: Tatsuya Sawasaki

A novel oncogene E3 ligase degrades deubiquitinating enzyme CYLD and promotes NF-κB activity

一种新型癌基因 E3 连接酶可降解去泛素化酶 CYLD 并促进 NF-κB 活性

• 发表时间: 2016
• 作者: Atsushi Uematsu;Hirotaka Takahashi;Hiroyuki Takeda;Yuuki Imai;Yuta Yanagihara;Fuminori Tokunaga;Roppei Yamada;Yohei Miyagi;Tatsuya Sawasaki
• 通讯作者: Tatsuya Sawasaki

Identification of a novel E3 ligase for deubiquitinating enzyme CYLD

去泛素化酶 CYLD 的新型 E3 连接酶的鉴定

• 发表时间: 2017
• 作者: Atsushi Uematsu;Hirotaka Takahashi;Hiroyuki Takeda;Yuuki Imai;Yuta Yanagihara;Tatsuya Sawasaki
• 通讯作者: Tatsuya Sawasaki