脱ユビキチン化酵素ＯＴＵＢ２によるＤＮＡ修復経路選択機構の解明

去泛素化酶 OTUB2 阐明 DNA 修复途径选择机制

• 批准号: 15J04738
• 负责人: 中嶋 一裕
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-24 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J04738/
• 关键词: 相同組換え; ユビキチン化

本年度は、OTUB2やRNF4が相同組換え修復に及ぼす影響について解析を行った。まず、OTUB1/OTUB2がRPA2 S4/S8リン酸化に生理的に関与するかを確認した。OTUB1をノックダウンしてもカンプトテシン処理後のRPA2 S4/S8リン酸化に影響はなく、OTUB1の生理的な関与は認められなかった。一方で、OTUB2ノックダウンによりRPA2 S4/S8リン酸化が低下したが、RPA2の損傷部位へのリクルートそのものが低下していた。この結果からは、OTUB2ノックダウンによりDNA end resectionが抑制されることが考えられた。続けて、RNF4に着目して解析を行った。RNF4存在下でユビキチン鎖形成が可能なE2結合酵素としては、UBCH5ファミリー,UBE2W,UBC13が報告されている。そこで、これらのE2酵素がRPA2 S4/S8リン酸化に必要か検討したところ、UBCH5CおよびUBC13が必要だった。この結果は、RPA2 S4/S8リン酸化には複数のユビキチン化経路が必要となることを示唆している。次に、カンプトテシンへの抵抗性におけるRPA2 S4/S8リン酸化の重要性を評価するために、RPA2 S4A/S8A安定発現細胞を作製した。この細胞でのRAD51 foci形成を観察したところ、foci形成に変化は認められなかった。しかし、foci解消については遅延しており、RPA2 S4/S8リン酸化が相同組換えに必要であることが示された。以上の研究により、脱ユビキチン化酵素OTUB2がS期における相同組換えをRPAのDNA損傷部位への局在を誘導することで促進することが示された。また、RNF4によるユビキチン化はRPA2 S4/S8のリン酸化を間接的に促進しており、このRPAのリン酸化が相同組換えに必要であることが示された。

This year, the same organization as OTUB2 RNF4 will review the revision and analysis of the line. Acid, OTUB1/OTUB2, RPA2 S4/S8, acid, acid and acid. OTUB1, acid, acid, On the other hand, OTUB2

项目成果

RNF4 and UBC13 suppress RAD51 recruitment through facilitating RPA S4/S8 phosphorylation

RNF4 和 UBC13 通过促进 RPA S4/S8 磷酸化抑制 RAD51 招募

• 发表时间: 2015
• 作者: Kazuhiro Nakajima;Shinichiro Nakada
• 通讯作者: Shinichiro Nakada

Simultaneous Single Nicking of Target Gene and Donor Plasmid Enables Safe and Efficient Gene Correction

目标基因和供体质粒的同时单切口可实现安全高效的基因校正

• 发表时间: 2016
• 作者: Kazuhiro Nakajima;Etsu Shu;Akiko Tomita;Yoshihiro Hirade and Shinichiro Nakada
• 通讯作者: Yoshihiro Hirade and Shinichiro Nakada