希少放線菌の運動性胞子が示す高速遊走運動の分子基盤の解明

阐明稀有放线菌运动孢子高速迁移的分子基础

• 批准号: 15J07768
• 负责人: 木村 知宏
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-24 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J07768/
• 关键词: 走化性; 高速遊走運動; ブレーキタンパク質; 細菌線毛; チオレドキシン; べん毛組み立て; 放線菌; 遊走子; べん毛モーター; 線毛; CRISPR/Cas9; 微生物の運動; トラッキング顕微鏡; べん毛形成

まず、本研究の対象であるActinoplanes missouriensisの遺伝子操作方法の改良に取り組んだ。様々な検討の結果、MS培地に終濃度40mMのMgCl2を添加した培地と、スターチを主成分とするISP4培地に0.05% Yeast extract, 0.1% Tryptone、終濃度40mMのMgCl2を添加した改変ISP4培地上で遺伝子組換えが極めて容易に行えるようになった。ブレーキタンパク質FtgAの機能解析では、栄養を感知した際のみにブレーキがかかる理由を解明するために、FtgAが存在するCheクラスター内の他の因子と、ブレーキの機能の発揮に関連があるのか検証するため、Cheクラスター1, 2, 3すべてを破壊した株に1コピーのFtgAを相補した株を作製した。この株で正常にブレーキがかかったことから、FtgAの機能とCheクラスター中の他の因子に関係はないと示された。FtgAの相互作用対象と示唆されているFliN, FliG, FliIの組換えタンパク質の取得は難航したが、最終的にGST融合タンパク質として取得に成功した。現在、プルダウン実験を行っている。べん毛形成に必須なチオレドキシンTrxAの機能解析では、CsrA-FliWシステム関係の遺伝子破壊株およびTrxAとの二重破壊株を作製した。その結果、FliWとCsrAは協働しており、おそらくCsrAはfliC mRNAのSD配列付近と、FliWの両者に結合できること、FliWはFliCに結合していることが示唆された。線毛の機能解析では、学習院大学中根助教との共同研究により大幅な進展が見られた。まず、遊走子線毛は平均5.6本、620nm、太さ5nmだった。また、線毛は水圧変化を受けると即座に引き込まれること、疎水性表面に付着すること、親水性表面には付着しないことが判明した。

The purpose of this study is to improve the method of Actinoplanes missouriensis manipulation. The results show that the main components of MS 40mM MgCl2 are 0.05% Yeast extract, 0.1% Tryptone and 0.1% Tryptone, respectively. It is very easy to improve the quality of ISP4 by adding the subgroup of ISP4. The FtgA machine is capable of analyzing and perceiving that the reason is clear. The reason is that the FtgA exists in the Che. There are other factors in the data. The Che is sensitive to the data. The reason is that the FtgA is the same. The normal condition of the plant shows that the other factors are displayed in the Che machine, and the other factors are displayed in the Che machine. The FtgA interaction image indicates that the FliN, FliG, and FliI interactions are successful, and that the most important GST fusion is successful. At present, we need to know that we are going to do something wrong. It is necessary to make sure that the hair is formed, that the TrxA machine can be analyzed, that the CsrA-FliW can be broken, and that the double breakage of the TrxA can be used as a tool. The results of the test, the FliW CsrA protocol, the fliC mRNA SD configuration, the FliW protocol, the FliW protocol, and the FliW protocol were used to indicate the accuracy of the test. The Maomao machine is able to analyze the university and the root teaching assistant in the university has made great progress in the joint research of the university. The average number of books of "Zaozi" and "Maomao" is 5.6copies, 620nm, and 5 nm books. The surface of the water, the water.

项目成果

希少放線菌Actinoplanes missouriensisの遊走子べん毛回転停止に必須な遺伝子ftgAの機能解析

ftgA 的功能分析，ftgA 是一种在稀有放线菌密苏里州放线菌中阻止游动孢子鞭毛旋转所必需的基因

• 发表时间: 2016
• 作者: 木村 知宏;種村 裕幸;手塚 武揚;大西 康夫
• 通讯作者: 大西 康夫

AMIS75470 is Essential for Flagellar Assembly in the Rare Actinomycete Actinoplanes missouriensis

AMIS75470 对于稀有放线菌密苏里州放线菌鞭毛组装至关重要

• 发表时间: 2017
• 作者: Tomohiro Kimura;Takeaki Tezuka;Shin-Ichi Aizawa;Yasuo Ohnishi
• 通讯作者: Yasuo Ohnishi

Actinoplanes missouriensisの遊走子はⅣ型線毛で固体表面へ付着する

密苏里游动放线菌的游动孢子附着在具有 IV 型菌毛的固体表面上。

• 发表时间: 2018
• 作者: 木村 知宏;中根 大介;手塚 武揚;相沢 慎一;西坂 崇之;大西 康夫
• 通讯作者: 大西 康夫

希少放線菌Actinoplanes missouriensisの遊走子が持つIV型線毛の機能解

稀有放线菌密苏里游动放线菌IV型菌毛的功能分析

• 发表时间: 2018
• 作者: 木村 知宏;手塚 武揚;相沢 慎一;大西 康夫
• 通讯作者: 大西 康夫

Actinoplanes missouriensisのべん毛形成に必須なチオレドキシンAMIS75470の機能部位および標的タンパク質の同定

密苏里游动动动菌鞭毛形成所必需的硫氧还蛋白 AMIS75470 的功能位点和靶蛋白的鉴定

• 发表时间: 2017
• 作者: 木村知宏;手塚武揚;相沢慎一;大西康夫
• 通讯作者: 大西康夫