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自然環境における放線菌の生理・生態に関する研究

自然环境中放线菌的生理生态学研究

基本信息

批准号：
15J08354
负责人：
河内護之
金额：
$ 2.83万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-24 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J08354/
关键词：
Streptomyces geiseus autoclaved soil sporulation 放線菌土壌培養 Streptomyces griseus 核酸抽出

项目摘要

放線菌の土壌培養について、昨年度までに、放線菌S. griseusの培養条件、核酸の抽出条件並びに土壌抽出液作成方法について検討を実施した。本年度は、これまでに確立した系を用い、グロースカーブを作成した。12時間おきに1週間サンプリングを計3回行い、RNAとDNAの抽出した。DNAを用い、ハウスキーピング遺伝子hrdBのコピー数を指標にグロースカーブを作成した結果、菌体がほぼ生育していないことが明らかとなった。そこで、発芽を促進する為に土培養時にカゼインを0.05%(g/gsoil)添加し再度培養を行い、実体顕微鏡並びにSEMにより観察した。その結果、明らかに添加前と比較し、気中菌糸並びに胞子形成が旺盛になっている様子が観察された。この条件で24hごとに計6日間サンプリングし、RNAとDNAの抽出を行った。グロースカーブを作成した結果、hrdBのコピー数が4日目に約1万倍になり、その後ややコピー数が減少した。以上の解析により、土壌でのS. griseusの生育の様子が初めて明らかとなった。続いて菌体が増殖している3daysとやや溶菌している5daysからRNAを抽出し、トランスクリプトーム解析に十分なRNA量の取得した。また、土壌培養抽出液寒天培地S. griseusの野生株を植菌し、１週間培養後RNAの抽出を実施した。その結果、トランスクリプトーム解析を実施可能な程度のRNAを取得した。これらのRNAを用いたトランスクリプトーム解析により、土壌での生育に必要とされる遺伝子群が明らかとなることが今後期待される。また、放線菌と糸状菌の共培養並びに放線菌の連続観察系については、本年度は、継続して実験を実施したが、連続観察の系の確立並びに共培養による新しい知見を得るには至らなかった。今後も継続的に解析していくことで連続観察系の構築や、共培養から新しい知見の発見を目指す。

The culture conditions of S. griseus, the conditions of nucleic acid extraction and the method of preparation of soil extract were studied. This year, please make sure that you use the information system and make sure that the system is ready for use. A total of 3 cycles and RNAs were extracted from DNA samples in 12 hours. The results of the DNA test were made by using the number of hrdB cells that were used to make the results of the experiment, and the bacteria were born in the first place. When the temperature is increased to 0.05% (g/gsoil), the culture line and microphone are added and SEM monitoring is performed. The results of the test showed that the bacteria were isolated and the cytoplasm was formed before the addition of the drug. Under the condition of 24 hours and 6 days, the samples were extracted from RNAs and RNAs. The results show that the number of hrdB cycles is about 10, 000 times higher than that in the fourth day, and the number of times higher than that in the next few days. The above analysis shows that the child is born in the first place of the child-bearing child, and that the child is born in the first place. Bacteria colonization, 3days bacteria, bacteriolysis, 5days, RNA extraction, RNA analysis, RNA assay. The extract of S. griseus was cultivated in cold weather. The wild strain of S. spp. Was cultured for 1 month. After 1 month of cultivation, the extract was extracted from the plant and applied to the plant. The result of the experiment, the result of the test, the result of the analysis, the result of the analysis, the result of the result, the result of the analysis, the result of the result and the result of the experiment. It is necessary to understand that it is necessary to give birth to a child. The subgroup of the child is aware that he is looking forward to the future. He is looking forward to the future. Bacteria, bacteria, In the future, we will make an analysis of the situation in the future. We will learn more about it, and we will learn more about it in the future.