天然資源からの中性脂質代謝を制御する低分子化合物の作用機序解析

自然资源中控制中性脂质代谢的低分子量化合物的机制分析

• 批准号: 15J12265
• 负责人: 小林 啓介
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-24 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J12265/
• 关键词: 天然物化学; 脂質代謝; オートファジー

真菌由来化合物ダイナピノンA (DPA) は、中性脂質であるトリアシルグリセロール (TG) およびコレステリルエステル (CE) の細胞内蓄積を阻害する。また、その機序は生合成経路の阻害ではなく分解経路の促進による可能性が示唆されている。そこで、脂肪滴分解経路の1つであるオートファジーへの影響を調べた。DPAの処理により、オートファジーマーカータンパク質であるLC3-II量の濃度依存的な増加が認められた。また、オートファジーの選択的な分解基質であるp62タンパク質の細胞内蓄積量がDPAの処理により濃度依存的に減少したことから、DPAはオートファジーを促進していることが示唆された。さらに、一般的に知られているオートファジー経路上の因子であるmTORやbeclin-1に対するDPA処理による影響を調べたが、これらに対する影響は確認されなかった。この結果から、DPAの作用点はこれら因子より下流、もしくは未知の経路を介している可能性が示唆された。さらに、蛍光緑色タンパク質 (GFP) が融合したLC3を発現する細胞の構築を行った。プラスミドを細胞にトランスフェクトし、シングルセルクローニングを行うことで、GFP-LC3安定発現細胞を取得した。現在は脂肪滴マーカーやリソソームマーカーとGFPの細胞内局在の解析を行っている。さらにケミカルバイオロジー的アプローチとして、ビオチン化誘導体をはじめとしたDPAのケミカルプローブを合成した。これら誘導体と細胞ライセートを反応させ、DPAの結合タンパク質を取得した。今後、各タンパク質の機能解析を通して、DPAが示す表現系との関連をさらに精査する。DPAについては、国内・国外学会で発表を行い、現在論文投稿の準備中である。その他、真菌由来であるボーベリオライドIIIの作用機序についても研究を行い、学会発表だけでなく、論文発表に至った。

Fungal origin compound ダ イ ナ ピ ノ ン は (DPA), A neutral lipid で あ る ト リ ア シ ル グ リ セ ロ ー ル (TG) お よ び コ レ ス テ リ ル エ ス テ ル (CE) の intracellular accumulation を resistance against す る. The また and そ sequence of the <s:1> mechanism <s:1> generates synthetic routes <s:1> hindering で なく なく decomposes routes <e:1> promoting による possibility が indicates されて る る る. Youdaoplaceholder0 を で, fat droplet decomposition pathway <s:1> 1 である である and トファジ へ へ へ affect を modulation べた. The DPA の 処 Richard に よ り, オ ー ト フ ァ ジ ー マ ー カ ー タ ン パ ク qualitative で あ る amount of LC3 - II の concentration dependent な raised が recognize め ら れ た. ま た, オ ー ト フ ァ ジ ー の sentaku な decomposition of matrix で あ る p62 タ ン パ ク qualitative の cell volume が DPA の 処 Richard に よ り concentration dependent に reduce し た こ と か ら, DPA は オ ー ト フ ァ ジ ー を promote し て い る こ と が in stopping さ れ た. さ ら に, general に ら れ て い る オ ー ト フ ァ ジ ー 経 road の factor で あ る mTOR や beclin 1 に す seaborne る DPA 処 Richard に よ る influence を adjustable べ た が, こ れ ら に す seaborne る influence は confirm さ れ な か っ た. こ の results か ら, DPA の point は こ れ ら factor よ り nasty, も し く は unknown の 経 road を interface し て い が る possibility in stopping さ れ た. さ ら に 蛍 light green タ ン パ ク mass (GFP) が fusion し た LC3 を 発 now す の る cell line build を っ た. プ ラ ス ミ ド を cells に ト ラ ン ス フ ェ ク ト し, シ ン グ ル セ ル ク ロ ー ニ ン グ を line う こ と で, GFP - LC3 stability 発 now cell を し た. Now, the <s:1> fat droplet <s:1> カ やリソソ ム ム ム カ と とGFP <s:1> is localized in the <s:1> resolution を line って る る る る. さ ら に ケ ミ カ ル バ イ オ ロ ジ ー of ア プ ロ ー チ と し て, ビ オ チ ン the inductor を は じ め と し た DPA の ケ ミ カ ル プ ロ ー ブ を synthetic し た. こ れ ら inductor と cells ラ イ セ ー ト を anti 応 さ せ, DPA の combining タ ン パ ク qualitative を obtain し た. In the future, each タ ン パ ク qualitative analytical を の function through し て, DPA が す performance system in と の masato even を さ ら に fine check す る. DPAに に て て て て, domestic and foreign academic societies で issue forms を に, papers are now being prepared for submission である. そ の he, fungal origin で あ る ボ ー ベ リ オ ラ イ ド の role III machine sequence に つ い て も research を だ い, learn 発 table け で な く, paper 発 table に to っ た.

项目成果

真菌由来 beauveriolide III の SOAT アイソザイム阻害活性機構に関する研究

真菌源白僵菌内酯III SOAT同工酶抑制活性机制研究

• 发表时间: 2016
• 作者: 小林 啓介;大城 太一;供田 洋
• 通讯作者: 供田 洋

Dinapinone Aによる脂質分解促進活性に関する研究

地萘酮A促进脂质降解活性的研究

• 发表时间: 2017
• 作者: 小林 啓介;大城 太一;供田 洋
• 通讯作者: 供田 洋

細胞内脂肪滴分解を促進する真菌由来化合物dinapinone Aの作用機序解析

真菌化合物地萘酮A促进细胞内脂滴降解的机制分析

• 发表时间: 2016
• 作者: 小林 啓介;大城 太一;供田 洋
• 通讯作者: 供田 洋

Sterol O-acyltransferaseアイソザイムに対するbeauveriolide IIIの阻害機構の解明

阐明白僵菌内酯III对甾醇O-酰基转移酶同工酶的抑制机制

• 发表时间: 2016
• 作者: 小林 啓介;大城 太一;供田 洋
• 通讯作者: 供田 洋

Sterol O-acyltransferase アイソザイムに対する beauveriolide III の阻害機構の解明

阐明白僵菌内酯III对甾醇O-酰基转移酶同工酶的抑制机制

• 发表时间: 2016
• 作者: 小林 啓介;大城 太一;供田 洋
• 通讯作者: 供田 洋