グリオーマ幹細胞維持・分化に関わるＣＳＰＧ４と分化ニッチの相互制御機構の解析

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本研究はグリオーマ幹細胞GSCの分化ニッチにおける分化誘導制御機構を明らかにするため, CSPG4と細胞内外で相互作用してGSCの分化誘導を制御する分子を高感度プロテオミクス法により網羅的に探索・同定することを目的としている.これまでに樹立している特性が異なる3種類のGSC (GSC03A, 03U, 07U) に加え, 新たに樹立されたクローン細胞 (GSC10025, GSC12037, U87Sp, U373Sp) を用いて, 分化誘導前後においてCSPG4に結合する分子群の同定および同定分子の機能解析を遂行した.当該年度では, CSPG4結合たんぱく質同定のため, 結合分子抽出の為の可溶化条件, 検出条件の検討を行った. また, CSPG4と結合するたんぱく質の一つとしてintegrin aVを同定し, この同定分子に対するGSCの維持・分化に対する影響をin vitroにおいて検討した. CSPG4siRNAを用いた実験結果から, CSPG4ノックダウンにおいてGSCの細胞増殖が減少することがわかった. また, CSPG4ノックダウン時に, 血清刺激を行っても分化マーカーであるGFAPの発現増加が認められなかったことから, CSPG4はGSCの維持・分化に必要不可欠な分子であることが明らかになった.さらに詳細な実験結果から, GSCの分化はCSPG4及びCSPG4の糖鎖により制御されていること, CSPG4の糖鎖はCSPG4とintegrin αV との結合を阻害することによりGSCを維持することを明らかにした. また糖鎖欠損によりCSPG4とintegrin αV との結合が増加し, GSCは分化することを明らかにし, CSはGSCの分化を阻害する因子, すなわちがん幹細胞性を維持する幹細胞性ニッチの構成因子であることを示唆した.