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迅速ペプチド集積反応の開発と光アフィニティプローブへの応用

快速肽积累反应的开发及其在光亲和探针中的应用

基本信息

批准号：
16F16344
负责人：
Bode Jeffrey
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-11-07 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は細胞内の生命現象に重要な役割を果たすタンパク質のSUMO化の過程を明らかにするための合成タンパク質プローブを創出することである。SUMO化に関わるタンパク質を化学合成し、合成タンパク質に光アフィニティータグを付加することにより、SUMO化の過程に関わるタンパク質の同定が可能となる。前年度までにタンパク質プローブの基盤となるタンパク質の全合成を達成し、さらに得られた合成タンパク質が生理活性を持つことが確認された。さらに精製のためのアフィニティタグと光クロスリンクのための光アフィニティタグを導入し、タンパク質プローブ候補となる合成タンパク質の誘導体を多数合成した。本年度はこれらの誘導体を用いてモデル系において、SUMO化に関連するタンパク質の捕捉に関して検討を行った。SUMO化に必須の基質タンパク質、SUMO E1リガーゼ、SUMO E3リガーゼおよびSUMOタンパク質を含む系を用い、光クロスリンクのためのUV光を照射することにより対象となるタンパク質の捕捉実験を行なった。結果として、いくつかの合成タンパク質誘導体をプローブとして用いつことでタンパク質が捕捉できることが明らかとなった。捕捉されたタンパク質は質量分析器を用いたプロテオミクス解析により構造を確認することに成功した。本課題終了後も引き続き、本化学合成タンパク質プローブを用いてケミカルバイオロジー研究への応用研究を進行している。特に細胞破砕液を用いることで未知のSUMO化関連タンパク質の同定に展開する予定である。

The purpose of this study is to clarify the process of SUMO in the cell, which is an important part of life. SUMO conversion is related to chemical synthesis, synthesis, and characterization. In the previous year, the total synthesis of the protein was achieved, and the physiological activity of the protein was confirmed. In addition, the synthesis of the induced substance of the purified substance is mainly carried out by introducing the purified substance into the substrate. This year, we will discuss the relationship between induction and quality control. SUMO E1, SUMO E3 and SUMO E3 are essential for the synthesis of organic compounds. The results show that the synthesis of the substance inducer is very important. The quality analyzer was successfully used to capture and analyze the structure. After the completion of this project, we will continue to study the application of this chemical synthesis technology. Special cell lysis solution is used in the preparation of unknown SUMO related substances.