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薬物代謝酵素の遺伝子解析に基づく個別化薬物療法の基盤開発－マラリア撲滅への応用－

基于药物代谢酶基因分析的个性化药物治疗的基础发展 - 在根除疟疾中的应用 -

基本信息

批准号：
16J01100
负责人：
齋藤雄大
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J01100/
关键词：
CYP2D6 遺伝子多型プリマキン抗マラリア薬バリアント

项目摘要

本研究の目的は、薬物代謝酵素CYP2D6の遺伝子多型が抗マラリア薬プリマキンに対する代謝活性に及ぼす影響を明らかにし、遺伝的なマラリア治療効果の個人差を解明することである。平成29年度は、(1)プリマキン代謝におけるCYP2D6遺伝子多型バリアントの酵素機能解析、(2)ケニア人集団におけるCYP2D6遺伝子多型解析、(3)CYP2D6遺伝子全長を挿入したミニジーン発現系によるイントロンSNPの評価を行った。(1)アミノ酸置換を伴う50種類のCYP2D6バリアントタンパク質をヒト胎児腎臓由来293FT細胞に発現させ、ミクロソーム画分を調製した。ミクロソーム画分に対して、プリマキンを様々な濃度で反応させ、酵素反応速度論的パラメータを算出した。その結果、野生型に比較して固有クリアランスが有意に低下するバリアントが明らかになった。これらのバリアントを有するマラリア患者では、プリマキンの代謝活性化が遅延し、治療効果が低下する可能性が示唆された。(2)マラリア流行地域であるケニア人195検体を解析対象として、CYP2D6遺伝子をPCR増幅し、サンガーシークエンス法により塩基配列を解析した。その結果、3つの新規遺伝子多型を同定した。さらに、これまでの報告を基に表現型の分類を行った結果、ケニア人集団の35％がCYP2D6低活性と予想された。本研究により、ケニア人集団に特徴的なCYP2D6低活性の原因となる遺伝子多型が明らかとなった。(3)イントロンSNPによるタンパク質発現への影響を評価する陽性コントロールとして、スプライシング異常を生じるCYP2D6*41を挿入した発現ベクターを用いたところ、イムノブロット法においてCYP2D6タンパク質の発現量低下が認められた。しかしながら、酵素活性を安定して測定するためには、更なる発現条件の最適化が必要であると示された。

The purpose of this study is to identify the polytype of the enzyme CYP2D6, an enzyme that metabolizes enzymes. There are individual differences in the treatment effect of the active and effective を明らかにし and the remaining なマラリア. Heisei 29は, (1) Functional analysis of CYP2D6 metabolite enzyme polymorphic enzyme, (2) Metabolic enzyme Analysis of CYP2D6 gene polytypes, (3) CYP2D6 gene full-length したミニジーン発 is now a によるイントロンSNPの综合価を行った. (1) Amin acid substituted 50 kinds of のCYP2D6 バリアントタンパクquality をThe origin of ヒトuterine kidney stasis 293FT cells is に発appears させ, ミクロソームdraws points and modulates した. The ミクロソームdraws the に対して, the プリマキンを様々なconcentration でreactionさせ, and the enzyme reaction rate theory パラメータをcalculates the した.その results, wild-type にして inherent クリアランスが intentional に low するバリアントが明らかになった.これらのバリアントを有するマラリアpatient では, プリマキンのIt is possible that metabolic activation is delayed and therapeutic effect is reduced, and that it is possible that it is not possible. (2) Malari popular area であるケニア人 195検体をANALYSIS 対 resemble として、CYP2 D6 PCR amplification method, PCR amplification method, and the analysis method of the D6 base alignment method. The result of その, 3つのnew rules and multiple types of そ子多を同定した.さらに, これまでの report をbase phenotypic classification を行った results, ケニア人集団の35% がCYP2D6 low activity と conceived された. In this study, we studied the reasons for the low activity of CYP2D6 in the Yokohama and Yokohama group. (3) Comments on the impact of the quality of the SNP SNP Cyp2 D6*41をInsert the ベクターを use the いたところ、イムノブロット法においてCYP2D6 タンパクquality の発下注められた. It is necessary to measure the enzyme activity and stabilize the enzyme activity and optimize the current conditions.