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観るだけでわかるタンパク質間相互作用解析法による繊毛へのタンパク質輸送機構の解明

使用一看就懂的蛋白质-蛋白质相互作用分析方法，阐明蛋白质向纤毛的转运机制

基本信息

批准号：
16J03865
负责人：
野崎梢平
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J03865/
关键词：
繊毛 intraflagellar transport BBSome 一次繊毛 Arl13b IFT-B複合体

项目摘要

一次繊毛は、ほぼ全ての動物細胞がもつオルガネラであり、微小管を骨格として細胞膜から突出した毛のような形態をしている。一次繊毛は、繊毛膜に局在する様々な受容体を介して細胞外の刺激を受容・伝達するアンテナのような役割を担っている。繊毛内外のタンパク質輸送はモータータンパク質と共役して繊毛内の輸送を担うIFT輸送装置とBBSomeと呼ばれるタンパク質複合体によって行われている。前年度までに、BBSomeは繊毛膜局在型GPCRであるGPR161の排出に必要であることを明らかにした。当該年度では、BBSomeとIFT輸送装置の機能の関連について研究を行った。まず、BBSomeとIFT輸送装置が直接相互作用する可能性をVIPアッセイによって調べた。すると、BBS1-BBS9二量体にIFT38が相互作用するとがわかった。次に、IFT38の欠失変異体を用いた相互作用解析により、IFT38のコイルドコイル領域以降を欠失したdC変異体はBBS1-BBS9二量体とは相互作用しないが、他のIFTサブユニットとの相互作用は維持した変異体であることを発見した。そこで、IFT38のノックアウト細胞を作製し、野生型IFT38やIFT38のdC変異体を発現させてレスキュー実験を行った。BBS9の局在は、野生型IFT38レスキュー細胞においても、dC変異体レスキュー細胞においても正常であったことから、BBS1-BBS9二量体とIFT38の相互作用はBBSomeの繊毛内局在には影響しないことがわかった。次に、GPR161の排出について調べると、野生型IFT38レスキュー細胞では、GPR161が正常に排出されるのに対し、dC変異体ではGPR161の排出が抑制された。このことから、BBSomeはBBS1-BBS9二量体はIFT38との相互作用を介してGPR161の繊毛からの排出を行っていることが明らかになった。

The hair of the whole animal cell is formed by a series of small tubes, bone cells and cell membranes. The primary hair and hair membrane are involved in the process of receptor stimulation outside the cell The mass transfer inside and outside the hair is carried out in a common way. The mass transfer inside the hair is carried out in a common way. In the previous year, it became clear that BBSome would need to discharge GPR161 from its hairy membrane-localized GPCRs. During the year, BBSome and IFT conveyor function correlation research was carried out. The possibility of direct interaction between BBSome and IFT transport devices is discussed. BSS1-BSS9 interaction with IFT38 The interaction analysis of IFT38 is based on the interaction analysis of IFT38. The interaction analysis of IFT38 is based on the interaction analysis of BBS1-BBS9. The interaction analysis of IFT 38 is based on the interaction analysis of IFT 38. The wild type IFT38 and IFT38 were found in the wild type. BBS1-BBS9 interaction with IBS38 in the wild type, IBS1-BBS9 interaction with IBS38 in the wild type, IBS1-BBS9 interaction with IBS38 in the wild type. In addition, GPR161 is normally excreted in the wild type IFT38 cells, whereas GPR161 is normally excreted in the wild type IFT38 cells, whereas GPR161 is inhibited in the wild type IFT 38 cells. BBSome BBS1-BBS9 binary molecules IFT38 interact with GPR161 and emit light.