細胞外基質ラミニンの分泌と基底膜形成を担う小胞輸送機構の解明

阐明负责细胞外基质层粘连蛋白分泌和基底膜形成的囊泡运输机制

• 批准号: 16J04152
• 负责人: 本間 悠太
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-22 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J04152/
• 关键词: 小胞輸送; Rab; ラミニン

上皮細胞の底面には基底膜と呼ばれる特殊な細胞外基質の層が存在しており、この基底膜への接着は、上皮細胞が極性を獲得し、形態形成を行うために必須である。基底膜の形成には、ラミニンを始めとする基底膜構成因子が底面側に特異的に分泌されることが必要と考えられるが、それを可能にする分子的実態はほとんど明らかになっていなかった。そこで本研究では、「ラミニンの分泌と基底膜の形成を制御する小胞輸送制御」という観点から、これに関わる分子を同定し詳細に解析することで、上皮細胞の極性形成・維持の分子機構の解明を目指した。まず、抗ラミニン抗体を用いた免疫染色やウェスタンブロッティングによって、細胞底面や培地中に分泌されたラミニンを検出できる系を確立した。続いて、細胞内小胞輸送の主要な制御因子であるRabファミリー遺伝子の関与を明らかにするため、全Rab遺伝子の網羅的なノックアウト細胞の作製を目指した。哺乳類細胞には約60種類のRab遺伝子が存在するが、機能の冗長性を考慮して、近縁のRabは同時にノックアウトすることとし、全41種類のRabノックアウト細胞株を樹立した。この細胞を用いて、上記の評価系を基準としたスクリーニングを行った結果、ラミニンの分泌と基底膜の形成ができなくなっているノックアウト細胞を一つ発見した。このRabのノックアウト細胞では、基底膜成分に限らず、広範な可溶性分泌タンパク質の分泌が阻害されていた。一方で、膜タンパク質の輸送に対する影響は比較的小さかった。また、分泌されなかった小胞は、リソソームに異所的に運ばれてしまうことが分かった。以上をまとめると、本研究における成果として、小胞輸送分野の研究全般に有用な全Rab遺伝子のノックアウト細胞を樹立することに成功した。さらに、目的としていた基底膜の形成に必要な遺伝子も同定することができ、今後の更なる解析に繋がる結果を得ることができた。

The bottom surface of epithelial cells has a basement membrane and a special layer of extracellular matrix exists. The basement membrane is connected, the polarity of epithelial cells is obtained, and the formation of morphology is necessary. Basement membrane forming factor, basal side-specific secretion of basement membrane constitutive factor It is necessary to test the numeric state of the molecule, and it is possible to do it.そこでThis study is about では、「ラミニンのsecretion and formation of basement membrane and control of cell transport」という観Point から、これDetailed analysis of the molecular structure of the molecular structure of the epithelium and the molecular mechanism of polarity formation and maintenance of epithelial cells.まず, anti-ラミニン antibody をいたimmunostaining やウェスタンブロッティングによって、The secretion of されたラミニンを検出できるsystem in the bottom surface of the cell is established.続いて, the main control factor of intracellular small cell transport, であるRabファミリー缝子の关与をMing らかにするため, all Rab leftovers の子のNARA's なノックアウトcell のproduced しした. There are about 60 types of mammalian cells, and there are about 60 kinds of Rab. abはにノックアウトすることとし, all 41 types of Rabノックアウトcell lines are established.このCell を use いて, the above mentioned evaluation system を benchmark としたスクリーニングを行った results, ラミニンのsecretion and formation of basement membrane ができなくなっているノックアウトcell を一つ発见した.このRabのノックアウトcell では, basement membrane component にlimit らず, 広法なsoluble secretion タンパク性の secretion が hinder されていた. The influence of one side and the quality of the film is relatively small.また, secrete されなかった小cellは, リソソームにdifferent place's にluck ばれてしまうことが分かった. The above research results, the research results of this study, and the overall research on the field of microcellular transport It's useful to use all Rab's leftover cells to establish successful ones.さらに、Purpose としていたThe formation of basement membrane is necessary な伝子も同定することができ、The future updateなるanalyzes the に systemがる resultsをget ることができた.