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Ｒｅｇｎａｓｅ－１を介した下気道ＩｇＡ分泌制御機構についての研究

Regnase-1介导的下呼吸道IgA分泌调节机制研究

基本信息

批准号：
16J08040
负责人：
中塚賀也
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J08040/
关键词：
IgA 気道上皮 Regnase-1 転写後調節粘膜免疫緑膿菌 RNase 肺炎

项目摘要

本研究は、mRNA分解酵素であるRegnase-1が、下気道のIgA分泌を制御する機構を明らかにするとともに、その生理的意義を明らかにすることを目的とするものである。昨年度までに、Regnase-1欠損マウスでは肺でのIgA分泌が亢進すること、気道上皮でpIgRやCCL28などのIgA分泌に関わる因子がRegnase-1の直接の標的であることを示した。本年度は、さらにRNA sequenceのデータ解析を進め、好中球遊走に関わる因子や内因性抗菌因子、T細胞との相互作用に関わる因子などの新規標的遺伝子を同定した。これらのmRNAが実際にRegnase-1によって認識されているかを確認するため、CRISPR/Cas9システムを用いてRegnase-1タンパクのC末端に人工ペプチドであるFLAG-Tagの配列を挿入したマウスを作成した。そのマウスの肺をhomogenizeしてFLAG-Tagに対する特異抗体によって免疫沈降を行い、Regnase-1結合RNAをRT-qPCRによって定量したところ、同定した遺伝子のRNA量がenrichmentしたことから、これらのmRNAがRegnase-1によって直接的に認識されることが示された。また、気道上皮特異的にRegnase-1を欠損するマウスを用いて緑膿菌感染モデルを解析したところ、これまでに得られたデータと一致して、このマウスでは肺内や気管支肺胞洗浄液中の好中球数増多を認めること、感染後の緑膿菌特異的IgA分泌の亢進を認めること、そしてこれらの所見に一致して緑膿菌再感染時に生存率の有意な改善を認めることが分かった。以上の結果をまとめると、気道上皮におけるRegnase-1はIgA分泌を制御する因子のみならず、内因性の抗菌分子や、好中球の遊走因子を制御することによって、気道上皮の感染防御機構を制御することが示された。

This study is aimed at clarifying the physiological significance of the regulation of IgA secretion by mRNA decomposing enzymes. In the past year, Regnase-1 deficiency has led to increased IgA secretion in the lung, and factors related to IgA secretion in the airway epithelium, such as pIgR and CCL28, have been shown to be direct targets of Regnase-1. This year, the analysis of RNA sequence has been improved, and the factors related to ball migration, endogenous antibacterial factors, and T cell interactions have been determined. This mRNA was identified by the sequence of Regnase-1 and CRISPR/Cas9 genes, and the sequence of FLAG-Tag was created by the sequence of Regnase-1 genes. For example, if you want to homogenize the protein, you can use the FLAG-Tag to detect the protein. If you want to identify the protein, you can use the RT-qPCR to detect the protein. If you want to identify the protein, you can use the RT-qPCR to detect the protein. The expression of P. aeruginosa specific IgA in the lung lavage fluid was increased after infection. The expression of P. aeruginosa specific IgA was increased after infection. The survival rate of Pseudomonas aeruginosa reinfection was significantly improved. These results indicate that Regnase-1 regulates IgA secretion, endogenous antimicrobial molecules, and migratory factors, and controls infection defense mechanisms in the airway epithelium.

项目成果

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专利数量（0）

Pulmonary Regnase-1 orchestrates the interplay of epithelium and adaptive immune systems to protect against pneumonia

DOI：
10.1038/s41385-018-0024-5
发表时间：
2018-04
期刊：
Mucosal Immunology
影响因子：
8
作者：
Y. Nakatsuka;A. Vandenbon;Takashi Mino;Masanori Yoshinaga;Takuya Uehata;X. Cui;A. Sato;T. Tsujimura;Yutaka Suzuki;A. Sato;T. Handa;K. Chin;T. Sawa;T. Hirai;O. Takeuchi
通讯作者：
Y. Nakatsuka;A. Vandenbon;Takashi Mino;Masanori Yoshinaga;Takuya Uehata;X. Cui;A. Sato;T. Tsujimura;Yutaka Suzuki;A. Sato;T. Handa;K. Chin;T. Sawa;T. Hirai;O. Takeuchi

Pulmonary Regnase-1 functions as a posttranscriptional switch in anti-bacterial immunity.

Pulmonary Regnase-1 在抗菌免疫中充当转录后开关。