膜タンパク質に基づいた貪食能を有するクルマエビ血球細胞の新規分類方法の開発

基于膜蛋白的吞噬能力对虾血细胞分类新方法的建立

基本信息

批准号：
16J08185
负责人：
小祝敬一郎
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tokyo University of Marine Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は，血球細胞を糖鎖に基づき分類するため，レクチンの血球細胞に対する反応性をフローサイトメーターおよび蛍光顕微鏡観察により確認した. その結果，クルマエビの血球細胞には，LEL および WGA が特徴的な染色性を示した.LEL は細胞表面に強い結合性を示す一方，WGA は細胞内の顆粒に強い結合を示すことが蛍光顕微鏡下で観察された.次に，ビオチン標識された LEL およびストレプトアビジン標識マイクロビーズを用いた細胞磁気標識法により， 2 つの血球細胞亜集団の分離に成功した . これら細胞集団は形態学的特徴およびその遺伝子転写産物の蓄積パターンから，既報の無顆粒球および顆粒球の 2 種類の集団であることが示唆された.その後，MACSシステムを用いた細胞亜集団の分離後，次世代シークエンサーにより各細胞亜集団の遺伝子転写産物を網羅的に解析した．LEL強陽性血球細胞では，トランスグルタミナーゼ関連遺伝子転写産物の蓄積が多かった．LEL弱陽性血球細胞では，抗菌ペプチドおよびクロッティング関連遺伝子転写産物の蓄積が多かった．また，in vitro でビーズの貪食を行わせた血球細胞をレクチン染色に供したところ，ビーズ貪食細胞に対して WGA が 100%の陽性率を示したことから，クルマエビにおいて顆粒球が貪食作用を主に担っていることが示唆された.

在今年，为了基于聚糖对血细胞进行分类，通过流式细胞仪和荧光显微镜证实了凝集素对血细胞的反应性。结果，LEL和WGA对Kuruma Shrimp的血细胞具有独特的染色特性。在荧光显微镜下观察到，LEL表现出与细胞表面的很强的结合，而WGA表现出与细胞内颗粒的结合。接下来，我们通过使用生物素标记的LEL和链霉亲和素标记的微型头成功地将两个血细胞亚群通过细胞磁标记分离。这些细胞群是其基因转录物的形态特征和积累模式，以及两种含有的粒细胞和粒细胞。有人建议这是一个类似的人口。使用MACS系统分离细胞亚群后，通过下一代测序仪对每个细胞亚群的基因转录本进行了全面分析。 LEL强阳性血细胞具有大量的转谷氨酰胺酶相关基因转录本。 LEL弱阳性血细胞的抗菌肽和与凝结相关的基因转录物的积聚大量。此外，当对珠子吞噬的血细胞受到凝集素染色时，WGA显示出100％的珠子吞噬细胞阳性率，这表明粒细胞主要负责Ruma Shrimp中的吞噬作用。