バイオチップを援用したクルマエビ血球細胞の多項目フェノタイピング

使用生物芯片对虎虾血细胞进行多项目表型分析

• 批准号: 19J00539
• 负责人: 小祝 敬一郎
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Chuo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-25 至 2022-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19J00539/
• 关键词: クルマエビ; Drop-seq; シングルセル解析; マイクロ流路; DLD

2019年度は、クルマエビ血球細胞をマイクロ流路にて分類および解析を行うための研究を行った。具体的には細胞のサイズに基づいた分離を行うためのマイクロ流路の開発およびシングルセルmRNA解析用の流路の作製を行った。サイズに依存した細胞分離チップには、決定論的横置換法と呼ばれる流路上に細かなマイクロピラーを配置した粒子の分離技法を転用した。理論上の細胞分離直径を8.3μmとしたチップを設計および作製した。圧力ポンプによってチップに細胞を送液し、特定の出口から回収された細胞の面積を計測した．本細胞分離チップによって，大・小のビーズが高い精度で分離できることを確認したのち、ホルマリン固定したクルマエビ血球細胞をチップに送液した。その結果、顕微鏡下の面積が90μm2以上のクルマエビ血球細胞が特定の出口に濃縮されていた。本チップについては現在、より高精度な分離に向けてデザインの検討を行っている。シングルセルmRNA解析チップには、既報の3系統送液チップのデザインを適用した。圧力ポンプを用いて細胞およびmRNAキャプチャービーズをチップに送液し、回収された液滴中に含まれる細胞およびビーズの割合を計測した。その結果、液滴中に細胞またはビーズがそれぞれ5%ほど封入されていた。細胞とビーズの共封入確率は0.3%ほどであり、1回の実験で約3,000個の細胞由来のmRNAが解析可能であることが示唆された。その後、メタノール固定したヒトおよびマウス由来の細胞株を用いて、シングルセルの液滴内への封入およびmRNAキャプチャービーズへの結合、逆転写反応を行い、次世代シークエンサー用のライブラリーを作製した。本ライブラリーをMiseqにてシークエンシングした結果、約500細胞が解析され、1細胞あたり3000遺伝子転写産物がシークエンス可能であった。

In 2019, the classification and analysis of blood cells were carried out. Specific cell base isolation and flow path development and flow path analysis The method of determining the horizontal displacement of the cell depends on the application of the particle separation technique. The theoretical cell separation diameter is 8.3μm. The area of the cells was measured when the pressure was applied to the cells and the specific outlets were returned. This cell separation is highly accurate, and the cells are fixed. The results show that the area under microscope is more than 90μm2, and the blood cells are concentrated in the specific outlet. This paper introduces the process of high precision separation and analysis. The three systems of liquid delivery system are applicable to the analysis of mRNA. The expression of mRNA and protein was measured in the medium and in the medium. The results of this study were as follows: 1. The co-expression rate of cell DNA was 0.3% and 1 cycle, respectively. About 3,000 cell DNA mRNA were analyzed. The cell lines from which it originated were isolated, isolated, and encapsulated in a single drop of mRNA. The cells were isolated and isolated from a single cell line. The cells were isolated from a single cell line. The results of this study were about 500 cells, 1 cell, 3000 cells, and the results were possible.

项目成果

マイクロ流路チップを用いた水産生物の細胞解析

使用微通道芯片进行海洋生物的细胞分析

• 发表时间: 2020
• 作者: Can Van Hao;Nakajima Shuta;Shuta Nakajima;Shuta Nakajima;Shuta Nakajima;Shuta Nakajima;松山沙織;松山沙織;松山沙織;松山沙織;松山沙織;松山沙織;松山沙織;Megumi Ochi and Saori Matsuyama;小祝敬一郎・村上友樹・鈴木宏明・小山喬・菊池潔・ 豊田敦・津田宗一郎
• 通讯作者: 小祝敬一郎・村上友樹・鈴木宏明・小山喬・菊池潔・ 豊田敦・津田宗一郎

機械学習によるクルマエビ血球細胞集団の分類

使用机器学习对虾血细胞群进行分类

• 发表时间: 2020
• 作者: Can Van Hao;Nakajima Shuta;Shuta Nakajima;Shuta Nakajima;Shuta Nakajima;Shuta Nakajima;松山沙織;松山沙織;松山沙織;松山沙織;松山沙織;松山沙織;松山沙織;Megumi Ochi and Saori Matsuyama;小祝敬一郎・村上友樹・鈴木宏明・小山喬・菊池潔・ 豊田敦・津田宗一郎;小祝敬一郎・八木滉亮・鈴木宏明・早川健
• 通讯作者: 小祝敬一郎・八木滉亮・鈴木宏明・早川健

Isolation technique of hemocyte sub-populations of kuruma shrimp and their molecular characteristics

车厘子虾血细胞亚群分离技术及其分子特征

• 发表时间: 2019
• 作者: Keiichiro Koiwai;Hidehiro Kondo;Ikuo Hirono
• 通讯作者: Ikuo Hirono