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インフルエンザウイルスにおける複製忠実度を基盤としたウイルス集団の生存戦略の解明

基于流感病毒复制保真度阐明病毒群体的生存策略

基本信息

批准号：
16J10490
负责人：
森幸太郎
金额：
$ 2.08万
依托单位：
Microbial Chemistry Research Foundation
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度に引き続き、インフルエンザウイルスポリメラーゼにおいて複製忠実度に影響を及ぼすアミノ酸残基のスクリーニングを行った。その結果、ウイルスポリメラーゼサブユニットの1つであるPB1上の44番目のアミノ酸がNからDに変異した株（PB1-N44D）が新規に得られた。PB1-N44Dのポリメラーゼ活性をルシフェラーゼアッセイにて調べたところ、野生型のポリメラーゼと同等の活性を示した。野生株、および変異株の感染細胞からウイルスゲノムを精製し、第8分節のゲノム上の41~291番目の領域のアンプリコンを作製し、次世代シーケンサーにて変異蓄積頻度を比較したところ、PB1-N44D変異株は野生株と比べて変異を生じにくいことが明らかとなった。PB1-N44D変異株の複製忠実度が変化した原因が、宿主因子や他のウイルス因子との相互作用に起因するのか、あるいは変異体のウイルスポリメラーゼ自身に起因するかを明らかにするため、野生株およびPB1-N44D変異株のウイルスポリメラーゼをウイルス粒子から精製し、in vitroによる複製忠実度の比較実験を行った。その結果、PB1-N44Dは野生型と比較して変異を生じにくい傾向がわずかに観察されたものの、有意な差ではなかった。このことから、PB1-N44D変異株は感染細胞中の宿主因子、あるいは自身のウイルス因子と強調して複製忠実度を向上させていることが推測された。インフルエンザウイルスのゲノム複製は宿主の核内で行われる。今後は、宿主細胞の核抽出液を精製し、in vitroによる複製忠実度の比較実験系に加えていくことで、PB1-N44Dと協調して複製忠実度の向上に関与する宿主因子を探索する。

In the past year, the number of active species was increased by 10%, and the number of active species increased by 10%. As a result, the new regulations were issued on PB1 and PB1-N44. PB1-N44D has the same activity as the wild type. The infected cells of wild strains and mutant strains must be purified. The control of the mutant cells in the upper 41~291 branches of the eighth subsection and the frequency of the mutant cells in the next generation are compared. PB1-N44D mutant strains are different from wild strains. The replication fidelity of PB1-N44D mutant strains is changed due to host factors, interactions between host factors and host factors, and changes due to host factors. The replication fidelity of PB1-N44D mutant strains is changed due to host factors. The replication fidelity of PB1-N44D mutant strains is changed due to host factors. PB1-N44D has a tendency to be wild-type and to be different. The PB1-N44D variant is a host factor in infected cells, and its own replication factor is expected to increase. A copy of the virus is transmitted to the nucleus of the host. In the future, the host cell nuclear extract purification, replication in vitro and comparison of fidelity system, PB1-N44D and coordination of replication in the host factors related to the upward