鳥類の精子走化性物質の同定および精子貯蔵メカニズムの解明

禽类精子趋化剂的鉴定和精子储存机制的阐明

• 批准号: 16J10724
• 负责人: 松崎 芽衣
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-22 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J10724/
• 关键词: 精子貯蔵管; 貯精; 精子; ウズラ; 精子侵入; β-defensin

本研究では、ウズラ精子の誘引物質を同定し、精子が精子貯蔵管(SST)へ侵入するメカニズムを解き明かすことを目指した。これまでの研究で、ウズラ精子貯蔵管ではAvBD 2, 6, 11, 12および13が高発現していることを確認しており、これら5種のAvBDをクローニングし、形質転換した大腸菌を用いてリコンビナントペプチドを作成した。リコンビナントペプチドを用いて5種のAvBDが精子の運動性に与える影響を調べたところ、AvBD 6を添加すると精子の直進速度および精子の細胞内pHが上昇することが明らかになった。また、平成28年度においてSSTへの精子侵入を評価する方法として新たにin vitro精子侵入アッセイ系を構築しており、本実験系がSSTへの精子侵入メカニズムを調べる上で非常に有用であったため、in vitro侵入アッセイ系を主軸に研究を展開した。このin vitroアッセイ系は、SSTを含む粘膜上皮およびhoechst 33342染色した精子を共培養することにより、in vitroで精子侵入を誘導するものである。このアッセイ系を用いて様々な条件下での精子侵入率を比較することで、SSTへの精子侵入に影響を及ぼす影響を調査した。粘膜上皮を60Cで熱処理すると精子がSSTへ侵入しなくなるが、50℃の熱処理群ではSSTへ精子が侵入することが明らかになった。このことは、60℃の熱処理により失活する精子誘引物質がSSTに存在することを示唆していると考えられる。50℃程度の熱に耐性を持つことから、誘引物質はペプチド等の低分子と予想された。また、SSTへの精子侵入に影響を与える要因を調べたところ、精子の運動性とSSTへの精子侵入率に相関が見られた。このことから、SSTへの精子侵入には精子の運動性が必要であり、精子が能動的にSSTへ侵入することが示唆された。

在这项研究中，我们旨在鉴定鹌鹑精子中的吸引剂，并揭示精子进入精子储存管（SST）的机制。先前的研究已经证实，AVBDS 2、6、11、12和13在鹌鹑精子存储管中高度表达，克隆了这五个AVBD，并使用转化的大肠杆菌创建了重组肽。当我们使用重组肽研究五种类型的AVBD对精子运动的影响时，发现AVBD 6的添加会增加精子的线性化速率和精子的细胞内pH。此外，在2016年，构建了一种新的体外精子入侵测定系统作为评估精子入侵SST的方法，并且由于该实验系统对于研究精子侵入SST的机制非常有用，因此我们主要对体外入侵测定系统进行了研究。该体外测定系统通过共同培养含有SST和HOECHST 33342染色精子的粘膜上皮来诱导精子进入体外。使用此测定系统，我们通过比较各种条件下的精子浸润率来研究精子侵袭SST的影响。粘膜上皮的热处理在60C上可防止精子进入SST，但已经发现精子在50°C下进入热处理组的SST。人们认为这表明SST中存在精子吸引剂，该精子在60°C下通过热处理停用。由于它在50°C左右具有耐热性，因此可以预测吸引剂是一个小分子，例如肽。此外，当我们研究影响精子进入SST的因素时，精子运动与精子进入SST的速率之间存在相关性。这表明精子进入SST需要精子运动，并且精子积极进入SST。

项目成果

Effects of a Protein Kinase Inhibitor on Sperm Motility in the Japanese Quail

• DOI: 10.2141/jpsa.0160079
• 发表时间: 2017-01-01
• 期刊: JOURNAL OF POULTRY SCIENCE
• 影响因子: 1.5
• 作者: Matsuzaki, Mei;Mizushima, Shusei;Sasanami, Tomohiro
• 通讯作者: Sasanami, Tomohiro

輸精管におけるウズラ精子の運動停止機構

鹌鹑精子在输精管内运动停滞的机制

• 发表时间: 2017
• 作者: Sasanami;T.;Matsuzaki;M.;and Mizushima;S.;松崎芽衣，イェンブイ，中村有希，前田照夫，都築政起，笹浪知宏;松崎芽衣，市川佳伸，水島秀成，広橋教貴，笹浪知宏;松崎芽衣，道羅英夫，佐々木達也，切岩祥和，Prodip Kumar Sarkar，水島秀成，笹浪知宏
• 通讯作者: 松崎芽衣，道羅英夫，佐々木達也，切岩祥和，Prodip Kumar Sarkar，水島秀成，笹浪知宏

ウズラ精子貯蔵管への精子侵入を誘導する要因

诱导精子进入鹌鹑精子储存道的因素

• 发表时间: 2017
• 作者: Sasanami;T.;Matsuzaki;M.;and Mizushima;S.;松崎芽衣，イェンブイ，中村有希，前田照夫，都築政起，笹浪知宏;松崎芽衣，市川佳伸，水島秀成，広橋教貴，笹浪知宏
• 通讯作者: 松崎芽衣，市川佳伸，水島秀成，広橋教貴，笹浪知宏

ウズラ精子貯蔵管に含まれる精子運動調節タンパク

鹌鹑精子储存管中含有的精子活力调节蛋白

• 发表时间: 2017
• 作者: Sasanami;T.;Matsuzaki;M.;and Mizushima;S.;松崎芽衣，イェンブイ，中村有希，前田照夫，都築政起，笹浪知宏;松崎芽衣，市川佳伸，水島秀成，広橋教貴，笹浪知宏;松崎芽衣，道羅英夫，佐々木達也，切岩祥和，Prodip Kumar Sarkar，水島秀成，笹浪知宏;松崎芽衣・笹浪知宏・道羅英夫・水島秀成
• 通讯作者: 松崎芽衣・笹浪知宏・道羅英夫・水島秀成

ニワトリ精子貯蔵管における貯蔵精子の更新に関する研究

鸡输精管储存精子更新的研究

• 发表时间: 2017
• 作者: Sasanami;T.;Matsuzaki;M.;and Mizushima;S.;松崎芽衣，イェンブイ，中村有希，前田照夫，都築政起，笹浪知宏
• 通讯作者: 松崎芽衣，イェンブイ，中村有希，前田照夫，都築政起，笹浪知宏