イヌの脊髄損傷におけるレトロウイルスベクターを用いた遺伝子治療の検討

使用逆转录病毒载体治疗犬脊髓损伤的基因治疗的检查

• 批准号: 16J10722
• 负责人: 宮穗 里江
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-22 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J10722/
• 关键词: レトロウイルス; 細網内皮症ウイルス; ウイルスベクター; 遺伝子導入; ASCT1; ASCT2; レトロウイルスベクター; RD-114ウイルス

本年度は、細網内皮症ウイルス(Reticuroendotheliosis virus：REV)エンベロープタンパク質(Env)を用いたウイルスベクターの性状解析および実用化を目指し、研究を行った。REVは哺乳類由来細胞において、中性ナトリウムアミノ酸トランスポーターであるASCT2分子を感染受容体に用いると考えられてきた。しかし、鳥類のASCT2遺伝子は消失していることが報告されており、鳥類における感染受容体は不明である。そこで、REVに感受性が高いイヌ由来細胞ではASCT1およびASCT2分子がREVの受容体として機能していることから、イヌのASCT1およびASCT2分子と相同性の高いニワトリのASCT1分子(gASCT1)の遺伝子をニワトリ由来細胞からクローニングした。REV非感受性細胞であるVero細胞にgASCT1を強制発現させたところ、REVシュードタイプウイルスの感染が認められた。CRISPR-Cas9システムにより作出したASCT1ノックアウトウズラ由来細胞（QT-6⊿ASCT1細胞）はREVシュードタイプウイルスに非感受性であったが、gASCT1の強制発現により感受性となった。以上より、鳥類におけるREVの感染受容体はASCT1であることを明らかにした。また、ヒト、ネコ、マウスのASCT1およびASCT2をそれぞれ強制発現させたVero細胞においてREVシュードタイプウイルスの感染性を調べたところ、いずれの動物種においてもASCT1のみがREVの感染受容体として機能していることを見出した。以上より、ヒト、イヌ、ネコ、マウスのうち、REVの感染受容体としてASCT2が機能しているのはイヌのみであり、トリを含めた多くの動物でASCT1が受容体として機能していることを明らかにした。本研究の成果はREVウイルスベクターの実用化に向けての足掛かりとなるものである。

This year, we will conduct research on Reticuloendotheliosis virus (REV), Env, and its application. REV is derived from mammalian cells and is neutral. ASCT2 molecules are used to infect receptors. Avian ASCT2 virus is missing, avian infection is unknown ASCT1 and ASCT 2 molecules are highly sensitive to REV, and ASCT1 and ASCT2 molecules are highly sensitive to REV. REV non-susceptible cells and Vero cells are stressed and infected. CRISPR-Cas9 is the most sensitive cell to stress. It is derived from ASCT 1 cells (QT-6 ASCT1 cells). The infected recipient of REV is ASCT1. ASCT1 and ASCT2 are expressed under stress in Vero cells, and the infectivity of ASCT1 and ASCT 2 in animal species is regulated. The above is the function of ASCT2, which contains many animals. ASCT1 is the function of ASCT2. The results of this study are directed to the implementation of REV.

项目成果

ニワトリにおける細網内皮症ウイルスの感染受容体の同定

鸡网状内皮增生病毒感染受体的鉴定

• 发表时间: 2018
• 作者: 宮穂里江;中川草;宮沢孝幸
• 通讯作者: 宮沢孝幸