アトピー性皮膚炎を制御するマイクロＲＮＡ依存性のＤＮＭＴ１発現機構の解明

阐明控制特应性皮炎的 microRNA 依赖性 DNMT1 表达机制

• 批准号: 17J40074
• 负责人: 芳田 祐子
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Musashino University (2018)Juntendo University (2017)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017-04-26 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17J40074/
• 关键词: 樹状細胞; アレルギー; 遺伝子導入機構; DNAメチル化; DNMT1; アトピー性皮膚炎; ストレス; ケモカインレセプター

本年度は、昨年度に引き続きアレルギー性皮膚炎における樹状細胞のDNAのメチル化解析を行った。また新たに、外来遺伝子がゲノムに組み込まれる機構について解析を行った。現在遺伝子導入技術についての研究が進み、一定条件のもと目的の遺伝子を持つ細胞を得ることが可能となった。遺伝子導入を疾患治療法として応用する試みも行われている。これまでに、遺伝子導入に用いるベクターの安全性には不明点が残されている。一方で、ベクターを用いない遺伝子導入法は、ゲノムに挿入される目的遺伝子の位置がランダムであり、挿入位置によっては他の遺伝子の発現などに影響する可能性があるなどの問題がある。そこで、これまで不明であった、ゲノムへの遺伝子導入機構を制御する、ゲノム側の要因を解明することにより、より効果的な遺伝子導入技術への応用に貢献する基盤を形成することを目的に解析を行った。外来遺伝子がゲノムに組み込まれる機構の解析について、遺伝子組み込みにおけるゲノム側の特性に着目して解析を行うため、ウィルスベクターを使用せず、生体内細胞に遺伝子を直接移入する方法である、ハイドロダイナミックインジェクション法を用いて実験を行った。この方法により特に肝細胞に高い効率で遺伝子導入することができるため、肝細胞のゲノムへの遺伝子組み込み機構に着目して解析を行うことができる。これまでに、EGFPを発現するプラスミドDNAを用いてインジェクションを行い、EGFP発現を指標として、プラスミドが取り込まれた細胞を単離した。単離した細胞のゲノムDNAを精製し、マウスSINE配列を標的とするプライマーを用いて、PCR法によりゲノムに組み込まれたプラスミドDNAが検出されることを確認した。

今年，我们对去年在过敏性皮炎中对树突状细胞的DNA进行了甲基化分析。我们还对外源基因纳入基因组的机制进行了新的分析。当前，对基因转移技术的研究已经进步，使得在某些条件下获得所需基因的细胞成为可能。也有尝试将基因转移作为疾病治疗方法。到目前为止，关于用于基因转移的向量的安全性已经有一些未知数。另一方面，不使用向量的基因转移方法存在问题，例如插入基因组的靶基因的位置是随机的，并且取决于插入位置，其他基因的表达可能会受到影响。因此，进行了分析，目的是阐明调节基因转移到基因组机制的先前未知因素，并形成一个基础，该基础有助于对基因转移技术的更有效应用。为了分析将外源基因纳入基因组的机制，我们进行了一项重点是遗传整合基因组侧特征的分析，并使用流体动力注射进行了实验，这是一种直接将基因转移到体内细胞的方法，而无需使用病毒载体。该方法允许基因转移至肝细胞，特别是高效，因此可以重点进行分析，重点是遗传整合到肝细胞基因组中。到目前为止，使用表达EGFP的质粒DNA进行注射，并使用EGFP表达作为指标分离了质粒的细胞。纯化了分离细胞的基因组DNA，并确认使用针对小鼠正弦序列的引物检测到质粒DNA整合到基因组中。

项目成果

ハイドロダイナミックインジェクション法による遺伝子のゲノム挿入の可能性

使用流体动力注射方法将基因插入基因组的可能性

• 发表时间: 2019
• 作者: Kubori T;Kitao T;Ando H and Nagai H.;北尾 公英;芳田祐子 渡辺恵史
• 通讯作者: 芳田祐子 渡辺恵史

Dysfunction of DNA methylation through CCR7 on skin dendritic cells cause atopic dermatitis inflammation

皮肤树突状细胞上CCR7 DNA甲基化功能障碍导致特应性皮炎炎症

• 发表时间: 2017
• 作者: 芳田祐子;早川国宏;藤城真樹;平井琢也;津島浩;渡部晃三;片岡裕子;池田圭吾;森本真司;関川巖
• 通讯作者: 関川巖