アトピー性皮膚炎を制御するマイクロＲＮＡ依存性のＤＮＭＴ１発現機構の解明

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本年度は、昨年度に引き続きアレルギー性皮膚炎における樹状細胞のDNAのメチル化解析を行った。また新たに、外来遺伝子がゲノムに組み込まれる機構について解析を行った。現在遺伝子導入技術についての研究が進み、一定条件のもと目的の遺伝子を持つ細胞を得ることが可能となった。遺伝子導入を疾患治療法として応用する試みも行われている。これまでに、遺伝子導入に用いるベクターの安全性には不明点が残されている。一方で、ベクターを用いない遺伝子導入法は、ゲノムに挿入される目的遺伝子の位置がランダムであり、挿入位置によっては他の遺伝子の発現などに影響する可能性があるなどの問題がある。そこで、これまで不明であった、ゲノムへの遺伝子導入機構を制御する、ゲノム側の要因を解明することにより、より効果的な遺伝子導入技術への応用に貢献する基盤を形成することを目的に解析を行った。外来遺伝子がゲノムに組み込まれる機構の解析について、遺伝子組み込みにおけるゲノム側の特性に着目して解析を行うため、ウィルスベクターを使用せず、生体内細胞に遺伝子を直接移入する方法である、ハイドロダイナミックインジェクション法を用いて実験を行った。この方法により特に肝細胞に高い効率で遺伝子導入することができるため、肝細胞のゲノムへの遺伝子組み込み機構に着目して解析を行うことができる。これまでに、EGFPを発現するプラスミドDNAを用いてインジェクションを行い、EGFP発現を指標として、プラスミドが取り込まれた細胞を単離した。単離した細胞のゲノムDNAを精製し、マウスSINE配列を標的とするプライマーを用いて、PCR法によりゲノムに組み込まれたプラスミドDNAが検出されることを確認した。