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Deciphering the genetics and molecular pathogenesis of heterotaxic and conotruncal congenital heart defects.

破译异位性和圆锥干先天性心脏缺陷的遗传学和分子发病机制。

基本信息

批准号：
17J09192
负责人：
中釜悠
金额：
$ 1.09万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2017
资助国家：
日本
起止时间：
2017-04-26 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

・先天性心疾患患者の網羅的ゲノム解析と情報科学的解析による候補遺伝子探索、さらにはアンチセンスモルフォリノによるスクリーニングを経て、これまでヒト疾患との関連が明らかになっていなかった遺伝子LZTR1およびDNAH10を疾患関連遺伝子として同定した。ゼブラフィッシュ胚およびマウス受精卵のゲノム編集を行い、上記遺伝子の変異体を作成し、in vivoにおける同遺伝子の機能解析を展開した。・LZTR1遺伝子改変ゼブラフィッシュのヘテロ欠失体同士の交配により、ホモ化に成功した。組織学的解析によって、LZTR1ホモ欠失体の心臓表現型は患者病態（円錐動脈幹奇形に伴う、心室肥大）を忠実に再現していた。・さらに免疫組織染色によって、遺伝子Xの下流シグナルの一つとして、ERKを同定し、本疾患のRAS/MAPK症候群（Noonan症候群類縁疾患）とのオーバーラップが示唆された。・一方、DNAH10遺伝子改変マウスのF0個体は不妊となり、系統維持・継代が困難であった。仕方なくF0個体を解析することとなったが、残念ながら遺伝子Y改変F0マウスは目的の患者表現型（内臓錯位）を呈さず、疾患原因遺伝子としての証拠を掴むことは出来なかった。・in vivo機能解析の結果を受け、現在はLZTR1タンパクのパートナー因子について、リコンビナントタンパク合成とそれを用いたプルダウンアッセイの準備を進めている。・また、本疾患モデルゼブラフィッシュから得られる単離心筋細胞は、哺乳動物のそれと異なり、中長期培養、薬剤刺激、RNA阻害実験に適しており、RAS/MAPK症候群関連心臓病の細胞レベルの病態生理を解析する上で、最適なプラットフォームを提供してくれる。現在、細胞エネルギー代謝が細胞機能・表現型を規定する、という作業仮説に基づき、RAS/MAPKの単離心筋細胞エネルギー代謝異常と機能連関の解析を行っている。

·The analysis of congenital heart disease patients needs to be done in the field of information science, such as candidate gene exploration, identification, identification, identification. The analysis of the function of the zygote in vivo is carried out in the compilation of the zygote in vivo, in the preparation of the variant of the zygote in vivo, and in the analysis of the zygote in vivo. LZTR1 gene mutation and mutation of the female partner Histological analysis revealed that LZTR1 had abnormal cardiac phenotypes and pathological changes in patients (pyramidal artery abnormalities, ventricular hypertrophy). Immunohistochemical staining, expression of protein X, ERK, RAS/MAPK syndrome (Noonan syndrome-like disease), and other symptoms were also observed. One side, DNAH10 gene change, F0 individual pregnancy, system maintenance, generation difficulties The patient phenotype (internal dislocation) of F0 is presented, and the cause of the disease is presented. In vivo function analysis results are not accepted, now LZTR1 is ready for use.·To provide an optimal solution for the analysis of pathological physiology of RAS/MAPK syndrome-related cardiac disease cells in vitro, in medium and long term culture, in vitro, in vitro, Now, cell metabolism, cell function, phenotype regulation, gene expression, RAS/MAPK, and cell metabolism abnormality analysis.

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Case Studies on the Molecular Diagnosis of Mowat–Wilson Syndrome: The Role of Chromosomal Microarray in Approaching Syndromic Congenital Heart Defects

Mowat-Wilson 综合征分子诊断案例研究：染色体微阵列在诊断综合征性先天性心脏缺陷中的作用

DOI：
10.24509/jpccs.180203
发表时间：
2018
期刊：
Journal of Pediatric Cardiology and Cardiac Surgery
影响因子：
0
作者：
Nakagama Yu;Inuzuka Ryo;Tanaka Yu;Shiraga Kazuhiro;Asakai Hiroko;Shindo Takahiro;Hirata Yoichiro;Takita Junko;Ogawa Seishi;Oka Akira
通讯作者：
Oka Akira

セピアプテリン還元酵素欠損症に認められたleaky splicing variant

在墨蝶呤还原酶缺乏症中观察到的泄漏剪接变异