Wirkungsweise eines neuartigen DNA-schädigenden Killertoxins

一种新型 DNA 损伤杀手毒素如何发挥作用

• 批准号: 5456873
• 负责人: Professor Dr. Friedhelm Meinhardt
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Molekulare Mikrobiologie und Biotechnologie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2004-12-31 至 2016-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5456873?language=en
• 关键词: Wirkungsweise; eines; neuartigen; DNA; sch

Im Killertoxin der Hefe Pichia acaciae (vom linearen Plasmid pPac1-2 kodiert) ist ein bisher unbekanntes, die Zielzelle schädigendes Prinzip verwirklicht. Das Toxin gelangt nach Bindung an seinen Zellwandrezeptor (Chitin) ins Innere der Zelle und löst dort eine Reaktion aus, die frappierende Ähnlichkeit mit derjenigen auf DNA-schädigende Agenzien aufweist. Im Verlaufe der zellulären Antwort auf das Toxin kommt es nämlich zur Auslösung des DNA-damage-checkpoints und zum Zellzyklusarrest in der S-Phase. Darüber hinaus zeigen Toxin-behandelte Zellen erhöhte Mutationsraten und nach fortdauerndem Kontakt erfolgt apoptotischer Zelltod. In den hier beantragten Arbeiten soll der Mechanismus der DNA-Schädigung aufgeklärt und die Grundlagen der Plasmid-vermittelten Toxinimmunität untersucht werden. Die intrazellulär aktive Untereinheit des Toxins soll nach heterologer Expression aufgereinigt und ihre Funktion in vitro analysiert werden. Ein mit Hilfe des isolierten Proteins generierter Antikörper soll zur subzellulären Lokalisation des Proteins sowie zum Nachweis von DNA-Bindung in vivo mittels Chromatin-Immunopräzipitation verwendet werden. Eine Analyse der Reaktion von Saccharomyces cerevisiae Mutanten mit definierten Defekten in verschiedenen DNA-Reparaturwegen soll klären, auf welche Weise die Zelle der Toxinschädigung entgegen zu wirken versucht und somit das Bild des Toxinwirkungsmechanismus vervollständigen. Die Arbeiten zur Toxinimmunität umfassen die Identifikation des Resistenz-vermittelnden Gens, dessen heterologe Expression und die Charakterisierung der Wirkung.

I m Killertoxx der Hefe Pichia acciae(vom linearen pPac1-2 kodiert)is ein Bisher unbekanntes，die Zielzelle Schädigendes Prince zip verwirklicht.几丁质是一种由几丁质和几丁质组成的毒素，这些甲壳素的来源是Zelle和Schädigende Agenzien aufweist，也就是几丁质和几丁质。我是Verlafe der zellulären Antwort auf das毒素kommt es nämlich zur Auslöung des DNA-Damage-Checkpoint and zum Zellzyklus在Der S阶段被捕。Darüber hinaus zeigen毒素-随之而来的是Zellen erhöhte突变sraten和nach fortdauerndem Kontakt erfolgt凋亡率Zelltod。在这里，我们发现了DNA-Schädigung aufgeklärt和Grundlagen-Vermittelten Toxin免疫质粒之间的相互作用。在体外分析中，我们检测了毒素在体内的表达及功能。Ein MIT Hilfe des Isolierten Proteins Genererter antikörper soll zursubzellulären Lokization des Proteins Sowie zum Nachweis von DNA-Bindung in vivo Mittels染色质-免疫印迹已被证实。我们分析了酿酒酵母突变株的DNA结构，并对其进行了定义，并对其进行了分析。抗药性、异源基因表达和特征的鉴定。