悪性黒色腫におけるＰＤ－１を介した制御性Ｔ細胞の抗腫瘍効果に対する役割の解明

阐明 PD-1 介导的调节性 T 细胞在恶性黑色素瘤抗肿瘤作用中的作用

• 批准号: 18J12760
• 负责人: 田中 亮多
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-25 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18J12760/
• 关键词: Treg; PD-1; 腫瘍免疫; 腫瘍

悪性黒色腫細胞株（B16）に卵白アルブミン（OVA）を発現させて抗原とした細胞株（MO4）を、尾静脈注射し移植すると、悪性黒色腫肺転移マウスモデルとなる。さらに、OVA特異的T細胞受容体をもつCD8 T細胞であるOT-I細胞を、OT-Iトランスジェニックマウス（OT-Iマウス）から採取し、MO4特異的CTLとして移入するモデルで実験を行ったところ、レシピエントマウスのPD-1発現欠損が癌免疫に有利に作用することを明らかにした。そして、このモデルでは、CTL上のPD-1は保持されていたことから、レシピエントマウス由来のTreg上に発現したPD-1は、癌免疫に対してより抑制性に機能していると考えられた。そこで、発現Treg上のPD-1を特異的に欠損させたコンディショナルノックアウトマウス（Treg特異的PD-1欠損マウス；PD-1fl/fl Foxp3Cre）を作製することとした。まず、CRISPR/Casシステムを使用して作成したPD-1floxマウス（PD-1fl/fl）（特許出願中）と、Treg特異的転写因子Foxp3にCreを組み込んだマウス（Foxp3Cre）とを交配し、安定的な繁殖に成功した。Foxp3Creマウスには、Foxp3-EGFP/creとFoxp3-YFP/creのを用いてPD-1floxマウスとの交配を検討したが、より安定的に交配が可能であったFoxp3-YFP/creを用いて繁殖を行った。次に、Treg特異的PD-1欠損マウスと野生型同腹仔マウスへそれぞれ腫瘍細胞を移植し、CTL上のPD-1欠損による抗腫瘍効果への影響の解析を行ったところ、野生型同腹仔と比較して、Treg特異的PD-1欠損マウスでは腫瘍増殖が抑制された。よって、in vivoでのがんマウスモデルにおいて、Treg上に発現したPD-1は、癌免疫に対してより抑制性に機能していることが示唆された。

The expression of protein and antigen in B16 cells was detected by tail vein injection and transplantation. CD8 T cell receptor OVA specific T cell receptor CD8 T cell receptor OT-I T cell receptor PD-1 on CTL is the most important component of cancer immunity. PD-l-specific loss detection on Treg (Treg-specific PD-1 loss detection; PD-1 fl/fl Foxp3Cre) CRISPR/Cas is used to create PD-l flox (PD-l fl/fl), Treg specific writing factor Foxp3, Cre, and stable reproductive success. Foxp3Cre: Foxp3-EGFP/cre: Foxp3-YFP/cre: Foxp3- Analysis of the effect of PD-1 deficiency on tumor cell transplantation and tumor growth in mice In vivo, PD-1 is detected on Treg, and cancer immunity is suppressed.