悪性黒色腫におけるＰＤ－１を介した制御性Ｔ細胞の抗腫瘍効果に対する役割の解明

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悪性黒色腫細胞株（B16）に卵白アルブミン（OVA）を発現させて抗原とした細胞株（MO4）を、尾静脈注射し移植すると、悪性黒色腫肺転移マウスモデルとなる。さらに、OVA特異的T細胞受容体をもつCD8 T細胞であるOT-I細胞を、OT-Iトランスジェニックマウス（OT-Iマウス）から採取し、MO4特異的CTLとして移入するモデルで実験を行ったところ、レシピエントマウスのPD-1発現欠損が癌免疫に有利に作用することを明らかにした。そして、このモデルでは、CTL上のPD-1は保持されていたことから、レシピエントマウス由来のTreg上に発現したPD-1は、癌免疫に対してより抑制性に機能していると考えられた。そこで、発現Treg上のPD-1を特異的に欠損させたコンディショナルノックアウトマウス（Treg特異的PD-1欠損マウス；PD-1fl/fl Foxp3Cre）を作製することとした。まず、CRISPR/Casシステムを使用して作成したPD-1floxマウス（PD-1fl/fl）（特許出願中）と、Treg特異的転写因子Foxp3にCreを組み込んだマウス（Foxp3Cre）とを交配し、安定的な繁殖に成功した。Foxp3Creマウスには、Foxp3-EGFP/creとFoxp3-YFP/creのを用いてPD-1floxマウスとの交配を検討したが、より安定的に交配が可能であったFoxp3-YFP/creを用いて繁殖を行った。次に、Treg特異的PD-1欠損マウスと野生型同腹仔マウスへそれぞれ腫瘍細胞を移植し、CTL上のPD-1欠損による抗腫瘍効果への影響の解析を行ったところ、野生型同腹仔と比較して、Treg特異的PD-1欠損マウスでは腫瘍増殖が抑制された。よって、in vivoでのがんマウスモデルにおいて、Treg上に発現したPD-1は、癌免疫に対してより抑制性に機能していることが示唆された。