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実時間選択的回収による１細胞遺伝子発現解析

使用实时选择性恢复进行单细胞基因表达分析

基本信息

批准号：
18J20143
负责人：
田中優実子
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-25 至 2021-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

ILC2の活性化過程における過渡的な遺伝子発現情報の取得に成功したことを踏まえ、本年度は以下の二項目に取り組んだ。①取得遺伝子のILC2活性化への影響の確認本手法によりmRNAレベルで過渡的に発現することが示唆された遺伝子の中には、2型免疫応答の誘導に重要な役割を果たす液性因子であるIL-4をコードするIL4と、マイクロRNAであるmiR-155をコードするMIR155HGが含まれていた。まず、IL-4がタンパク質レベルでもILC2の活性化の過程で過渡的に産生されるのかを確認するために、LCI-Sを用いてIL-4の分泌動態を1細胞レベルで測定した。その結果、複数の細胞から過渡的なIL-4の分泌を認めた。IL-4の受容体をILC2は発現していることから、ILC2は活性化の過程でIL-4を過渡的に分泌し、オートクライン的に自身の活性化を促進している可能性が示唆された。また、MIR155HGの発現を抑制するDecoy RNAをILC2にエレクトロポレーション法で導入し、LCI-SでIL-13の分泌応答を測定することを試みた。しかしながら、導入条件に課題が残り、MIR155HGの発現を抑制した際の効果の確認には未だ至っていない。②本手法の他の生命現象への応用研究計画では、本手法を用いて線維芽細胞における概日リズムの遺伝子発現変動を網羅的に取得する予定であった。しかしながら、線維芽細胞のような接着細胞は今回構築したガラスキャピラリーを用いた回収法で回収することが困難であることが明らかとなったため、異なる細胞種を用いて計画を進めることとした。そのなかで、明暗周期に合わせて細胞分裂を行う紅藻の1種であるCyanidioschyzon merolaeを題材として選び、生育条件や回収タイミングの検討などを行った。しかしながら、1細胞回収をするには至らなかった。

This year, the following two projects were selected for the successful acquisition of information on the transition of ILC2 activation. (1) To confirm the effect of ILC2 activation on gene expression. This method is used to detect the expression of IL-4, miR-155 and MIR-155HG, which are important for the induction of type 2 immune response. IL-4 secretion kinetics was measured in a cell cycle during the activation of ILC2 and the identification of the transition between IL-4 and ILC2. As a result, the secretion of IL-4 by multiple cells was recognized. The possibility that ILC2, a receptor for IL-4, may be activated during the process of IL-4 secretion and IL-4 activation itself is suggested. The expression of MIR155HG was inhibited by Decoy RNA, ILC2 and IL-13 secretion. The results of the test were confirmed when the MIR 155HG was detected. (2) The application of this method to other biological phenomena is planned. The method is used to obtain the predetermined information about the development and evolution of DNA in cells. The cell line is connected to the cell line. The cell line is connected to the cell line. Cyanidioschyzon merolae, a species of red algae, is selected from the group consisting of the following species: Cyanidioschyzon merolae, Cyanidioschyza merolae, Cyan 1 cell back to back.