バクテリア細胞へのマイクロインジェクション操作による長鎖ＤＮＡ導入システムの構築

使用显微注射到细菌细胞中构建长链 DNA 导入系统

• 批准号: 18J20258
• 负责人: 高橋 沙和子
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Toyama Prefectural University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-25 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18J20258/
• 关键词: マイクロインジェクション; バクテリア; スフェロプラスト; プロトプラスト; 巨大化; ゲノムDNA; DNA複製; 金属塩

本研究では、バクテリア細胞に様々な異種ゲノムDNAを導入し、どのようなゲノムDNAが宿主の生命活動に影響するのかを調べることを目的とした。そのための効率的な方法の確立に向けて、2018～2020年度にかけて、マイクロインジェクション可能なバクテリア細胞の作製方法の確立と巨大細胞へのマイクロインジェクションに取り組んだ。最終年度では、エンテロコッカス・フェカリスの巨大化プロトプラストに対し、グラム陽性細菌（Bacillus subtilis、Enterococcus faecalis、Lactobacillus curvatus、Lactococcus lactis）およびグラム陰性細菌（Deinococcus grandis、Erythrobacter litoralis、Escherichia coli、Lelliottia amnigena）の8種類のゲノムDNAをそれぞれ導入し、合計126細胞の巨大化への影響を調べた。その結果、巨大化に影響を与えたゲノムは、宿主細胞と進化系統の関係が影響しておらず、また、ゲノムDNAの導入による巨大化への影響は、巨大化が抑制される傾向であった。その要因として、大量の導入DNAが類似配列領域に交雑したためと考えられるが、これを確かめるためには導入ゲノムの細胞内動態を調べる必要がある。本研究では、バクテリアのゲノムサイズの長鎖ＤＮＡを、短期間において100を超える巨大細胞に対して行い、低労力・短時間で導入することに成功した。また、巨大細胞の構築は、遺伝子操作ではなく、物理的に細胞を大きくする方法であるため、特定の宿主細胞ではなく、どのような宿主にも適応できる可能性を秘めている。その際に、培地中の金属塩組成が巨大化に影響することも既に明らかにしており、その影響は、進化的に近縁なバクテリア間で似ている可能性を示した。

The purpose of this study is to determine whether or not all kinds of DNA are registered, and that the host of DNA is responsible for life activities. The method for determining the accuracy of the data acquisition rate is to determine the accuracy of the data acquisition system for the year 2018 and 2020. The method is to determine the size of the cell size and to determine the size of the system. The most recent year of the year, the largest number of bacteria (Bacillus subtilis, Enterococcus faecalis, Lactobacillus curvatus, Lactococcus lactis), the number of bacteria (Deinococcus grandis, Erythrobacter litoralis, Escherichia coli, Lelliottia amnigena) in the category of bacteria (Deinococcus grandis, Erythrobacter litoralis, Escherichia coli, Lelliottia amnigena). The results show that there is a significant increase in the number of bacteria. The results of the experiment, the impact of the impact and the impact of the host system, the impact of the DNA on the performance of the system, and the suppression of the impact on the system. The reason for this is that a large number of DNA types seem to be configured in the field. Please make sure that the information is entered into the cell because it is necessary. In this study, long-term DNA operation, long-term operation, short-term operation, short-term operation, and short-term operation were successful in this study. This is the case of a large cell, a large cell, a sub-operation, a physical cell, a specific host, a possibility, a secret. In the middle of the world, there is a great deal of change in the composition of the metal industry. In the past, there is a clear understanding that the current situation is similar to that in the near future.