α７ニコチン受容体の経時的発現動態解析と炎症応答抑制機序の解明

分析α7烟碱受体随时间的表达动态并阐明炎症反应抑制机制

基本信息

批准号：
18J21166
负责人：
三原大輝
金额：
$ 1.79万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-25 至 2021-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

α7nAChR (以下α7) は、アルツハイマーの標的分子として着目されてきた。近年、α7はマクロファージ等の免疫担当細胞にも発現し、同受容体の活性化が炎症やアレルギー応答を抑制することが多数報告されており、α7は様々な疾患の病態生理機能を担う可能性がある。しかし、α7と線維化に関してはほとんど報告されていない。そこで本年度は、in vivoの病態モデルにおけるα7の機能解析を①肝臓線維症モデル、②腹膜線維症モデルの2モデルにおいて行った。①肝臓線維症モデルには四塩化炭素誘発性の肝線維症モデルを採用した。経時的に肝臓の含有コラーゲン量を測定すると、1.5週が「線維化進行期」、4週が「線維化完了期」であることが判明した。そこで野生型マウスとα7欠損マウスで肝臓線維症モデルを作製すると、線維化進行期ではα7欠損マウスにおいて線維化促進遺伝子のmRNA発現が抑制され、線維化完了期ではα7欠損マウスにおいて含有コラーゲン量が抑制された。以上からα7は線維化を促進するシグナルに関与していることが予測された。そこで、そのシグナルを詳細に解析するため、α7のリガンドであるアセチルコリンを合成する酵素、アセチルコリントランスフェラーゼ (ChAT) の発現を蛍光免疫染色により分布を解析すると、四塩化炭素により障害をうけた肝細胞でChATを発現していることが見いだされた。次にα7の発現細胞の同定を試みた。本年度は肝臓の線維化において最も重要な役割を担う肝星細胞に着目した。発現を解析すると、静止型肝星細胞では発現が見られなかった一方で、活性型肝星細胞でα7の発現が確認された。②メチルグリオキサール (MGO) を用いて野生型マウス、α7欠損マウスで腹膜線維症モデルを作製し、線維化の進行度を測定した。その結果、肝臓線維化モデルと同様に、α7欠損マウスにおいて線維化は有意に抑制された。

α7NACHR（以下称为α7）已重点是作为阿尔茨海默氏症的靶分子。近年来，α7在免疫维护细胞（例如巨噬细胞）中也表达，据报道，同一受体的激活抑制炎症和过敏反应，α7可能在各种疾病的病理生理学中起作用。但是，很少有关于α7和纤维化的报道。因此，今年，在两个模型中进行了体内病理模型中α7的功能分析：1）肝纤维化模型和2）腹膜纤维化模型。 1）将四氯化碳诱导的肝纤维化模型用作肝纤维化模型。当随着时间的推移测量肝脏中包含的胶原蛋白的量时，发现1.5周是“纤维化的渐进时期”，而4周是“完整的纤维化期”。因此，当在野生型小鼠和α7缺乏小鼠中制备肝纤维化模型时，抑制了益元基因的mRNA表达α7-清除纤维化的非纤维化缺失 - 非纤维化 - 非纤维化 - 非纤维化 - 非纤维化 - 非纤维化 - 非纤维化 - 非纤维化 - 非纤维化 - 非纤维化 - 非纤维化 - 非纤维化 - 非纤维化 - 非纤维化 - 非纤维化的不纤维化 - 不纤维化的不纤维化 - 缺乏纤维化 - 不纤维化 - 不纤维化 - 非纤维化 - 非纤维化 - 非纤维化 - 非纤维化 - 非纤维化 - 非纤维化 - 非纤维化 - 非纤维化 - 非纤维化 - 非纤维化 - 非纤维化纤维化s-defibrosis-defibrosis-defibrosis-defibrosis-defibrosis-defibrosis-defibrosis-defibrosis-defibrosis-defibrosis-defibrosis-defibrosis-defibrosis-defibrosis-defibrosis-defibrosis-defibrosis-defibrosis-defibrosis-defibrosis-defibrosis-从以上，可以预测α7参与促进纤维化的信号。因此，为了详细分析信号，通过荧光免疫染色分析了乙酰胆碱转移酶（CHAT）的分布，一种合成α7配体的酶，并发现CHAT在碳四氯酸碳二氯化物损坏的肝细胞表中表达。接下来，我们尝试鉴定表达α7的细胞。今年，我们专注于肝脏星细胞，这在肝纤维化中起着最重要的作用。分析表达时，在静态肝星状细胞中未发现表达，但是在活性肝星状细胞中证实了α7表达。 2）在野生型小鼠和α7缺陷型小鼠中，使用甲基乙二醇（MGO）制备腹膜纤维化模型，并测量了纤维化的进展。结果，类似于肝纤维化模型，纤维化在α7缺陷型小鼠中得到了显着抑制。