Proteolysis-based targeting of transcription factor RUNX1 using Ubiquitin-Proteasome pathway

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A:当該年度はRUNX1の分解誘導を行う“PROTACs”作成の為、RUNX1及び基質E3リガーゼSTUB1にそれぞれ結合する化合物の探索を行った。昨々年度、ソフトウェア“AutoDock Vina”を用いてバーチャルスクリーニングを行い、20万化合物の中からRUNX1又はSTUB1それぞれに結合する化合物の候補をそれぞれ1万化合物まで絞り込んでいる。また、バーチャルスクリーニングにより選定した候補化合物が、実際に標的タンパク質に結合するかどうかを実証する手法として、タンパク質の熱安定性から分子間相互作用を評価する“Thermal Shift assay”利用して、RUNX1又はSTUB1に濃度依存的に結合する化合物の同定に成功した。現在、同定した化合物を利用して“PROTACs”の合成に取り組んでおり、将来的に造血器腫瘍の治療薬開発へと繋げたい。B:申請者は、RUNX1をユビキチン化するE3リガーゼ (STUB1,RNF38,DTX2)を同定しており、それらE3リガーゼのRUNX1に対する機能解析がもう一つのテーマである。昨年度は、DTX2がRUNX1のユビキチン化を誘導して、RUNX1の機能を負に制御することを突き止めた。本年度は、DTX2に関してさらに詳細な解析を進め、DTX2によるRUNX1のユビキチン化がRUNX1自身の活性に重要なアセチル化を低下させることで、RUNX1の機能を負に制御している事を見出した。現在、論文投稿に向けた国際誌の査読を受けている。この結果は、DTX2の活性を制御することで、RUNX1が関与する造血器腫瘍を治療できる可能性を示唆している。以上のことから、テーマA及びB共に昨年度計画した実験計画に概ね沿う形となっており、当該年度における研究への取り組み及び成果は、期待通りに進展したと言える。