权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

グルタチオン代謝を担う古典的酵素の新規機能：破骨細胞活性化の構造基盤

负责谷胱甘肽代谢的经典酶的新功能：破骨细胞激活的结构基础

基本信息

批准号：
18J22606
负责人：
高尾春奈
金额：
$ 1.98万
依托单位：
University of Miyazaki
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-25 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

γ-グルタミルトランスペプチダーゼ（GGT）の分子機能の解明を進めていく中で、酵素活性の分子機能に関して進展があった。hGGTの基質認識機構を解明するために、５種類の基質結合アナログ型阻害剤を用いた結晶を析出させて構造解析をした。これらの解析から、hGGT-基質結合アナログ型阻害剤複合体の構造決定に成功した。しかし、グルタチオン（GSH）のCys-Gly領域に相当する電子密度が3箇所に見られた。hGGTは転移酵素としての一面を持つため、これら3箇所の電子密度はアクセプター基質由来の電子密度の可能性が示唆された。そこで、hGGT-基質結合アナログ型阻害剤複合体にジペプチド（アクセプター基質）を添加して結晶を作製した。hGGT-基質結合アナログ型阻害剤-アクセプター基質複合体の結晶は析出したが、構造解析までには至らなかった。また、これまでのhGGTの構造解析の結果から、申請者は分子表面に存在するCys50-Cys74およびCys192-Cys196がhGGTのダイナミックな構造変化に関与すると予想し、これらのCys残基に変異導入を試みた。変異導入による酵素活性の低下から、hGGT変異体の発現が追えなくなることが懸念された。そこで、hGGTが糖鎖修飾を受けることに着目し、糖鎖をトラップするカラムを用いることで精製過程を簡易化させることができた。さらに、酵素活性が消失したhGGTの変異体を検出するために、hGGT標品からポリクローナル抗体を作製した。ELISAによる力価を評価した結果、高感度の抗hGGT抗体であることが明らかとなった。今後、抗体による特異的なアフィニティー精製を試みる予定である。

The molecular mechanism of gamma-ray emission chromatography (GGT) can be used to understand the progress of the molecular mechanism of enzyme activity. The hGGT basic knowledge institute explains that the basic system and the basic system are combined with the analysis of the system by means of the crystal analysis. The success rate was determined by the combination of hGGT- analysis and the combination of anti-virus and anti-virus. In the field of GSH, the field of Cys-Gly is equivalent to that of the density of electrons. On the other hand, the hGGT transfer enzyme has a significant effect on the electron density of the electron density sensor, which indicates the possibility of the electron density effect. The combination of anti-virus and hGGT--based devices combined with the combination of anti-virus and anti-virus is used to add the results of the test to make the test. The hGGT- gene was combined with the gene blocking agent-the gene complex was isolated from the virus, and the gene was analyzed. The results of hGGT analysis show that the molecular surface of the applicant is sensitive to Cys50-Cys74, Cys192-Cys196 and hGGT, and the Cys residues are introduced into the test kit. The enzyme activity is low, the hGGT is low, and the enzyme activity is low, and the enzyme activity is low. For example, the hGGT sugar repair system is closely watched, and the sugar treatment system is used to facilitate the processing of the product. The enzyme activity disappears, the hGGT activity disappears, and the hGGT label shows that the antibody does not exist. The results of ELISA test and the high sensitivity of anti-hGGT antibody were significantly higher than those of control group. In the future, the antibody will be specific in the future.