卵子が持つ精子DNA損傷を修復する能力の分子機構の解明

阐明卵子修复精子DNA损伤能力的分子机制

基本信息

批准号：
20H03254
负责人：
大野みずき
金额：
$ 11.32万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

当該年度は前年度に引き続き、DNA損傷を持った精子が受精した際の卵子中のDNA修復機構の重要性を明らかにするためのマウスの交配実験を行った。塩基除去修復、ヌクレオチド除去修復、DNAミスマッチ修復機構に属する遺伝子の改変マウスはC57BL/6Jcマウスにバッククロスしながらヘテロの状態で系統維持を行った。実験に使用する際にそれぞれの系統内のヘテロ欠損マウスの雌雄を交配しホモ欠損マウスを得た。DNA修復遺伝子ノックアウトマウスのホモ欠損メスマウスは、生後8週齢まで通常飼育し、野生型オスマウスと交配し産仔を得た。オスマウスは酸化剤投与群と非投与コントロール群の2分に分け、投与群では生後４週齢より酸化剤である臭素酸カリウムを自由飲水形式で投与し、期間終了後の生後８週齢時点からメスマウスと交配した。非投与群は通常飼育を行い同じ週齢から交配を開始した。それぞれの組み合わせの交配で、出産回数、産仔数と死産仔数、産仔の表現型などを解析した。全ての組み合わせ群の交配で少なくとも2匹のメスから複数産仔が得られ、その仔には顕著な表現型異常は観察されなかった。このことから、これらのDNA修復機構を完全に欠損によってメスの生殖細胞機能は不全になることはなく、少なくとも若い週齢では生殖細胞の成熟、排卵、妊娠、出産が可能であることがわかった。一方で、酸化剤を投与した野生型マウスオスとの交配では、メスの遺伝子型グループ間で平均産仔数や死産仔の割合に差がある傾向が見られたため、さらに個体数を増やして解析を進めた。その結果、塩基除去修復機構に属し酸化DNA損傷を修復するタンパク質をコードする遺伝子が欠損したメスマウスでのみオスマウスへの酸化剤投与による影響が見られた。今後この遺伝子についての解析を進める。さらに、次世代シーケンスによる親子トリオ解析を行いde novo生殖細胞変異の解析も進める予定である。

在同一年的同年，我们在小鼠中进行了一项交配实验，以阐明当施肥DNA损伤的精子时，DNA修复机制的重要性。及其基因属于基础切除修复，核苷酸切除修复和DNA错配修复机制的摩托群体保持在异源状态，同时又反向跨C57BL/6JC小鼠。当在实验中使用时，将每条线中异性缺陷小鼠的雄性和雌性交配以获得缺陷的小鼠。通常将DNA修复基因敲除小鼠的均缺陷雌性小鼠保持直至8周龄，并与野生型雄性小鼠交配以获得出生。将雄性小鼠分为两分钟：氧化剂辅助组和非管理对照组。在该组中，溴酸钾是一种氧化剂，以4周龄的时间从自由饮用水形式施用，并与该期间结束后8周的雌性小鼠交配。通常保留非管理组，并在同一周开始交配。分析了每种组合的交配，分析了出生的数量，犊牛的数量，犊牛的数量以及犊牛的表型。在所有组合组中，至少两名女性获得了多个犊牛，在犊牛中未观察到明显的表型异常。这表明，由于这些DNA修复机制的完全缺陷，女性的生殖细胞功能不会受到损害，并且至少在年龄较小，生殖细胞的成熟，排卵，妊娠和分娩可能可能受损。另一方面，当与氧化剂施用的野生型小鼠雄性交配时，女性基因型组的平均犊牛数量和死胎率存在差异，因此通过增加犊牛的数量进一步进行了分析。结果，仅在缺乏编码属于碱基切除修复机制的蛋白质的基因并修复氧化性DNA损伤的基因的雌性小鼠中才观察到氧化对雄性小鼠的影响。将来我们将继续分析该基因。此外，将使用下一代序列进行亲子三重奏分析来分析从头生殖细胞突变。

项目成果

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专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

rpsLトランスジェニックマウスを用いたセシウム137の慢性的内部被ばくによる体細胞突然変異の解析

使用rpsL转基因小鼠分析慢性内暴露于铯137引起的体细胞突变

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
大野みずき;鷹野典子;中島裕夫;石原弘;中津可道;續輝久
通讯作者：
續輝久

Analysis of De novo Germline Mutations in DNA Repair Deficient Mice Lines

DNA 修复缺陷小鼠系的从头种系突变分析

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Aoki Y;Taniguchi Y;Matsumoto M;Matsumoto M;Ohno M;Masumura K;Sasaki S;Tsuzuki T;Yamamoto M;Nohmi T;Mizuki Ohno
通讯作者：
Mizuki Ohno

psLトランスジェニックマウスを用いたセシウム137の慢性的内部被ばくによる体細胞突然変異の解析

使用 psL 转基因小鼠分析慢性内暴露于铯 137 引起的体细胞突变