細胞接着における複数の蛋白質間相互作用を選択的に制御可能な化学遺伝学法の開発

开发一种化学遗传方法，可以选择性控制细胞粘附中的多种蛋白质-蛋白质相互作用

• 批准号: 22J01075
• 负责人: 妹尾 暁暢
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-22 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22J01075/
• 关键词: 細胞接着

本研究では細胞接着蛋白質であるN-カドヘリンが持つ複数の蛋白質-蛋白質間相互作用を区別して制御する技術の開発を行った。蛋白質-蛋白質間相互作用を実測するため、表面プラズモン共鳴法を活用した相互作用測定系の構築を行った。センサー基板上にカドヘリン分子をアミンカップリング法で固定化すると、顕著な蛋白質活性の低下がみられた。そこで、ビオチン-ストレプトアビジンキャプチャー法での固定化方法へと切り替えるべくAvi-tagを付加した組換え蛋白質の調製およびビオチン化反応の進行を確認した。この系を用いれば蛋白質-蛋白質間相互作用を制御できる分子の探索・評価を進めることができる。また、既に取得していたカドヘリン阻害剤に関して上記の系を用いた相互作用の阻害試験を行った。その結果カドヘリンが持つ３種類の相互作用の内、１種類のみを阻害している可能性が示唆された。分子動力学的シミュレーションと合わせることによって、その阻害メカニズムは相互作用中間体の構造を変化させることに由来するメカニズムであることが示唆された。さらに、細胞レベルでの測定系の立ち上げも行った。本研究ではモデル細胞の他にカドヘリンを内在的に発現している細胞の利用も検討している。そのような細胞株を購入し、ウェスタンブロッティングによって目的のカドヘリン分子の発現を確認した。さらに免疫染色によって膜上に局在しているカドヘリン分子も確認する系の構築が進んでいる。上記のin vitroのアッセイ系においてて蛋白質-蛋白質間相互作用を制御できる分子が見つかれば、その分子を細胞に添加した際にカドヘリンの膜状の局在がどのように変化していくかを追跡できるようになると期待される。

The purpose of this study is to determine the complexity of protein-protein interaction in order to control the development of protein technology. The protein-protein interaction method was used to determine the protein-protein interaction, the protein-protein interaction was used to determine the protein-protein interaction. On the substrate, the molecules were immobilized, the protein activity was low and the activity was low. The method of immobilization is necessary for the determination of Avi-tag protein, and so on. The system uses the protein-protein interaction to control the molecular exploration of the protein in order to improve the performance of the protein chain. The system uses the interaction to block the behavior of each other. The results show that there is a significant difference in the possibility of class 3 interactions and class 1 interactions. The molecular dynamics is characterized by the formation of the body in the interaction, the formation of the body, the formation of the body, the origin of the molecular dynamics, the molecular dynamics. This is the first time to determine the accuracy of the measurement system. The purpose of this study is to make use of the internal cells in this study to make use of the cells. The cell line was introduced into the cell line, and the cell line was confirmed by molecular recognition. Immunostaining was performed on the membrane to make sure that the system was in progress. In the last part of the in vitro system, the interaction between proteins and proteins is used to control the molecular interaction between proteins, which is used to control the molecular interaction between proteins, and the molecular cell is used to increase the temperature.