权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

転写因子KLFファミリーの機能から紐解く腸管炎症制御と線維化メカニズム

KLF转录因子家族的功能揭示肠道炎症控制和纤维化机制

基本信息

批准号：
22K08082
负责人：
片野敬仁
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08082/
关键词：
マクロファージ KLF4 炎症性腸疾患線維化 KLF

项目摘要

本研究では、マクロファージの極性を司る転写因子ネットワークと、炎症プロセスにおけるM1/M2サブクラス（M2a, M2b, M2c）と腸管上皮・間質筋線維芽細胞との相互作用を明らかにすることを目的に、とくにKLF4によるマクロファージ極性誘導の制御機構から炎症小腸上皮における線維化誘導機構に着目して研究を遂行した。マクロファージの極性誘導におけるKLF4の機能解析として、ヒト単球細胞（THP-1）にPMA刺激をし、IFN-γ、LPSで刺激を与えM1に、IL-4、IL-13の刺激でM2aに分化誘導を行った。IgGでM2bに、IL-10でM2cに誘導した。マクロファージ各サブクラスにおいてKLF4発現が異なることを確認した。各サブクラスのKLF4ノックダウンにより、TNFαをはじめとする炎症性サイトカインマーカー発現が有意に上昇し、KLF4がM１様の極性への誘導に関与していることが示唆された。腸管筋線維芽細胞株（IMF）を用いて、M0、M1、M2a、M2b、M2cの培養上清との共培養での線維化マーカーの変化を確認した結果、M2bが腸管上皮の線維化誘導に抑制的に作用することが示唆された。M2bへの極性誘導後に特徴的に発現するIL10がIMFのαSMA発現を低下させたことから、IL10が線維化抑制の重要な因子である可能性を見出した。一方、M2cの培養上清との共培養ではスクラッチアッセイでのIMFのhealing rateが有意に上昇しており、M2cが腸管線維化に促進的に作用することが示唆された。ヒトiPS細胞から樹立した小腸上皮の３次元培養オルガノイドを用いて、さらに実験的操作性を向上させるために、air-liquid interface環境下で平面的に腸管上皮の立体構造を再現する培養系を樹立した。このヒトiPS細胞由来小腸上皮細胞を用いてアスピリン粘膜傷害を再現した。

This study was carried out to investigate the mechanism of polarization induction of KLF4, the mechanism of polarization induction of inflammation, the mechanism of linear maintenance induction of intestinal epithelium, and the interaction between M1/M2 cells (M2a, M2b, M2c) and intestinal epithelium and interstitial muscle cells. Functional analysis of KLF4 induced by PMA, IFN-γ, LPS and M1, IL-4, IL-13 in THP-1 cells. IgG M2b, IL-10 M2c. KLF4 is the only one that can be identified. KLF 4 of each cell is related to the induction of M1 polarity and TNFα is related to the intentional rise of inflammatory cells. The effect of M2b on the inhibition of the induction of intestinal epithelial tissue maintenance was confirmed by using medium, M0, M1, M2a, M2b, and M2c culture supernatants. The possibility that IL-10 may be an important factor in the suppression of linear dimensionality is also revealed. The co-culture of culture supernatant of one side and M2c showed that the IMF's healing rate was intentionally increased, and M2c played an important role in promoting the maintenance of intestinal tract. 3-D culture of iPS cells to establish a planar intestinal epithelium in an air-liquid interface environment The iPS cells are derived from small intestinal epithelial cells.