Development of a new treatment method for repairing intestinal epithelial function of inflammatory bowel disease by human pulp MSC-conditioned medium

2022年度は、炎症性腸疾患のモデルマウスであるデキストラン硫酸ナトリウム（DSS）誘導性腸炎マウスにおける不死化歯髄幹細胞培養上清（SHED-CM）の治療効果について検討を行った。① DSS腸炎マウスでの治療効果：C57BL/6マウスに3%DSSを1週間自由飲水させ、２日おきに計5回SHED-CMまたはコントロール培地を腹腔内投与すると、コントロール培地に比べ、SHED-CM投与により体重減少の回復が有意に早かった。10日後、腸組織の全長を比べると、SHED-CM投与により腸の長さが短くなり、粘膜固有層リンパ球のCellularityや細胞内サイトカインの発現解析により、特に抑制性の骨髄由来抑制細胞（MDSC）の割合が増加傾向にあった。次に、腸組織の細胞溶解液を調製し、腸組織の上皮バリアー機能を担う接着分子デスモグレイン2（DSG2）の発現をウエスタンブロットで調べると、SHED-CM投与により増加傾向にあった。② SHED-CMのサイトカイン網羅解析：SHED-CM中のサイトカイン量をRayBio 社のHuman Cytokine Antibody Arrayを用いて網羅的に定性発現解析を行うと、RANTES、Angiogenin、MMP-10、Osteoprotegerin、TIMP-2、HGF、MMP-1、TIMP-1という順で多かった。そこで、腸炎誘導への関与が報告されているマトリックスメタロプロテアーゼ（MMP）およびその阻害剤（TIMP）の腸での発現増強をRT-qPCR解析により調べると、SHED-CMとコントロール培地投与で有意な差は見られなかったが、発現の差は見られなくても、SHED-CM中のTIMP-1/2による腸粘膜でのMMP活性の抑制効果があるのではと、現在検討を続けている。

2022年度は、炎症性腸疾患のモデルマウスであるデキストラン硫酸ナトリウム（DSS）誘導性腸炎マウスにおける不死化歯髄幹細胞培養上清（SHED-CM）の治療効果について検討を行った。① DSS腸炎マウスでの治療効果：C57BL/6マウスに3%DSSを1週間自由飲水させ、２日おきに計5回SHED-CMまたはコントロール培地を腹腔内投与すると、コントロール培地に比べ、SHED-CM投与により体重減少の回復が有意に早かった。10日後、腸組織の全長を比べると、SHED-CM投与により腸の長さが短くなり、粘膜固有層リンパ球のCellularityや細胞内サイトカインの発現解析により、特に抑制性の骨髄由来抑制細胞（MDSC）の割合が増加傾向にあった。次に、腸組織の細胞溶解液を調製し、腸組織の上皮バリアー機能を担う接着分子デスモグレイン2（DSG2）の発現をウエスタンブロットで調べると、SHED-CM投与により増加傾向にあった。② SHED-CMのサイトカイン網羅解析：SHED-CM中のサイトカイン量をRayBio 社のHuman Cytokine Antibody Arrayを用いて網羅的に定性発現解析を行うと、RANTES、Angiogenin、MMP-10、Osteoprotegerin、TIMP-2、HGF、MMP-1、TIMP-1という順で多かった。そこで、腸炎誘導への関与が報告されているマトリックスメタロプロテアーゼ（MMP）およびその阻害剤（TIMP）の腸での発現増強をRT-qPCR解析により調べると、SHED-CMとコントロール培地投与で有意な差は見られなかったが、発現の差は見られなくても、SHED-CM中のTIMP-1/2による腸粘膜でのMMP活性の抑制効果があるのではと、現在検討を続けている。