優性遺伝性成長ホルモン欠損モデルマウスの作製と成長ホルモン分泌不全発症機序の解明

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優性遺伝性GH1遺伝子異常症モデルマウスにおけるGH分泌不全の分子生物学的機序を解明するため、マウスの内因性Gh遺伝子のexon 3をCRISPR/Cas9を用いて欠失させたモデルマウスを作製し、申請者らが先行研究で樹立したヒトGH1遺伝子ノックインマウスと同等か、より重症な表現型を得ることに成功した。このマウスを用いて以下2つのstrategyで研究を進めている。①小胞体に局在するexon3が欠失したGH(Δ3GH)が小胞体ストレスを引き起こすかどうか、マウス下垂体を用いたリアルタイムRTPCRやウェスタンブロッティング、TUNEL染色を行う。Xbp1遺伝子のスプライシング変化を検出する方法をスクリーニングとして用い、違いが見られた週数のマウスを用いてよりextensiveに解析を進める方針である。②Gh KOマウス(-/-)と、片アリルにΔ3Ghを有するマウス(-/Δ3)を用いて、下垂体のtranscriptome解析を行うことで、Δ3ＧＨによる下垂体細胞の転写産物への影響を網羅的に解析する。また、Δ3 GHを本来発現しない別の臓器にてCAGプロモーター下で発現させることで、下垂体で起こっている現象をより簡便に、より顕著に検出し、疾患の発症機序解明を目指す方法も模索している。内分泌臓器としては、分泌機構を持ち小胞体の発達した膵β細胞や、アクセスしやすい副腎などを考えている。組織量が採取しやすいものとして肝臓があげられるが小胞体などの分泌機構が異なるため注意が必要である。