FIB加工薄膜における微生物その場検出法の開発

FIB处理薄膜中微生物原位检测方法的开发

基本信息

  • 批准号:
    21K18658
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 3.99万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
  • 财政年份:
    2021
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2021-07-09 至 2024-03-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

昨年度の検討から,SYBR Green Iが走査型透過X線顕微鏡での検出に適していないことが明らかとなったため,今年度は計画通り,他の標識物質の探索を行った.まず,以下の20種類の物質で標識されたEUB338のFISHプローブに対し(Cy3-tyramide,Cy3.5,Cy5,BIO,BIOdT,DBCOTEG,AmC12,AmC3,2OMeA,5MedC,BHQ1dT,BHQ2dT,BioON,BioTEG,PHO,AmC6,DeoxyInosine I,DeoxyInosine U,Azido,Alkyne),走査型透過X線顕微鏡によって炭素と窒素のNEXAFSスペクトルを取得した.その結果,Cy3-tyramideの炭素スペクトルには約285.2 eVと約285.8 eVに特徴的なピークが認められた.そこで,Cy3-tyramideによるCARD-FISHを適用した大腸菌をδ-MnO2と混合し,それらを炭素支持膜付き銅グリッド上に載せて走査型透過X線顕微鏡分析を行った.その結果,蛍光観察でCARD-FISH標識されていることが明らかな大腸菌からは,タンパク質由来の約288.2 eVのピークに加え,約285.2 eVのピークも得られた.このピークはCy3-tyramideのみの場合に比べると小さく,また約285.8 eVのピークは認識できなかったが,CARD-FISH標識されている場所に特異的に分布したことから,Cy3-tyramideに由来するものと思われる.これらのことから,検討した標識物質の中では,Cy3-tyramideが走査型透過X線顕微鏡による検出に最も適していると結論された.本年度はまた,新手法の潜在的適用対象である様々なマンガン・炭酸塩試料に関しても,予察的検討を開始した.
SYBR Green I was examined by X-ray microscopes yesterday, and this year it is planned to explore its marker substances. The following 20 species of substances were identified by FISH for EUB338 (Cy3-thyramide, Cy3.5, Cy5, BIO, BIOdT, DBCOTEG, AmC12, AmC3, 2OMeA, 5MedC, BHQ1dT, BHQ2dT, BioON, BioTEG, PHO, AmC6, DeoxyInosine I, DeoxyInosine U, Azido, Alkyne), and were identified by X-ray microscopy for NEXAFS. As a result, the carbon emission of Cy3-acrylamide is about 285.2 eV ~ 285.8 eV. Card-FISH was applied to Escherichia coli, δ-MnO2, and mixtures of Cy3-tryptamine and Cy3-tryptamine. As a result, CARD-FISH identification was detected at about 288.2 eV. The CARD-FISH marker is a site-specific distribution of Cy3-thyramide, which is about 285.8 eV lower than that of Cy3-thyramide. In this study, Cy3-thyramide was found to be the most suitable marker for X-ray microscopy. This year, the potential application of the new method is discussed.

项目成果

期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    長岡壮太;福本学;鈴木正敏;木野康志;岡部宣章;大野剛;深海雄介;佐々木佑二郎,藤田和彦,白石史人
  • 通讯作者:
    佐々木佑二郎,藤田和彦,白石史人
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    0
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  • 发表时间:
    2018
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  • 通讯作者:
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