Elucidating the possible mechanism to cope with the insecticides in Kuruma prawn (Penaeus Japonicus)

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本研究では殺虫剤に曝露されたクルマエビ個体の中で、「脱皮しなかった個体」にフォーカスし、その特徴を分子・代謝レベルでの理解を深め、クルマエビの殺虫剤に対する適応戦略を明らかにする。計画している課題1～4のうち、2022年度課題2，3についてその概要を報告する。【課題2】「脱皮しない」個体に特徴的な遺伝子群の抽出：クルマエビを用いたフィプロニル曝露試験（20 および100 ng/L）を新たに行った。曝露個体を用い、total RNAを抽出後、次世代シーケンサー（mRNA-seq）によるトランスクリプトーム解析を行った。得られたシーケンスデータは、クルマエビゲノムにマッピング後、BLAST検索を経て発現量解析（GO解析）を行った。その結果、脱皮個体で発現量が変動した遺伝子、フィプロニル曝露により発現量が変動した遺伝子があることを確認した。現在検体数を増やして再解析を行っており、フィプロニルの代謝に関与する候補酵素の絞り込みや殺虫剤曝露下での脱皮・未脱皮個体間での脱皮制御関連遺伝子群の抽出を進めている。【課題3】脱皮関連代謝物の測定：脱皮前のクルマエビでは、解糖系の中間代謝物（3ホスホグリセリン酸、ホスホエノールピルビン酸）が増加することが報告されている。そこで、これらの代謝物をクルマエビ稚エビ頭胸殻から抽出・分析する方法を検討した。その結果、頭胸殻を酸処理後、陽イオン交換樹脂で精製することで、これらの代謝物を液体クロマトグラフ質量分析計（LCMSMS）により高感度に検出可能であることを確認した。