真の性決定遺伝子Sry-Tよる性決定の転写制御メカニズムの解明

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転写因子が標的遺伝子を活性化または抑制する際には、各々が標的に応じた適切な結合パートナーと複合体を形成することが重要である。ほ乳類Y染色体上の遺伝子Sryは、雄への分化を誘導する性決定のマスター転写因子である。しかし、1991年にSryが発見されてから約30年が経つにも関わらず、Sryが雄分化を誘導する際の機能的な結合パートナーは未だに同定されていない。本研究では、真の性決定遺伝子Sry-Tと結合するタンパク質をBioID法で同定し、Sry-Tによる性決定の転写制御メカニズムの解明することを目的とする。今年度は、Biotin化酵素AirIDをSry-T遺伝子座にノックインしたマウスを作製した。しかし、このマウスは雄から雌への性転換の表現型を示し、系統を樹立することが出来なかった。そこで、代替案として、Biotin化酵素TurboIDを連結したSry-T (Sry-T-TurboID)またはNLSを付加したTurboID (TurboID-NLS)を強制発現するES細胞株を樹立した。これらの細胞を用いてBioIDによるMS解析で相互作用タンパク質を同定し、Sry-T-TurboIDとTurboID-NLSのスコア比からSry-Tに特異的に相互作用するタンパク質のリストを作成した。得られた遺伝子リストを、申請者が既に取得している胎生11.5日生殖腺の遺伝子発現データと照合し、特に生殖腺に発現するSry-T結合クロマチン因子の候補として2つの遺伝子を特定した。