ホールマウント多重染色標本を用いた組織構築の定量的解析

使用整体多重染色标本对组织结构进行定量分析

• 批准号: 21K12258
• 负责人: 坂田 ひろみ
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kanazawa Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K12258/
• 关键词: 組織透明化; 多重染色; 画像解析

本研究は、近年我々の研究グループが開発した迅速組織透明化法（RAP)を用い、発生毒性試験に応用可能な組織構築の定量的解析法を確立することを目的としている。2年目となる令和４年度は、マウス胎児および臓器のWhole mount標本と厚切りスライス標本でRAP-IHCによる免疫染色や各種染色を行い、高速共焦点画像取得が可能なハイスループット細胞機能探索システムを用いて標識構造物の3D像描出を試みた。胎生10日のマウス胎児Whole mount標本をRAP-IHCで染色した。一次抗体には抗Neurofilament抗体、二次抗体にはAlexa fluor 488 anti-mouse IgGを用いた。染色後、高屈折率溶媒で透徹して免疫陽性反応をハイスループット細胞機能探索システムCV7000（横河電機）にて観察・撮像した。20 マイクロメーター毎に合計2 mmの深部スキャンを行って取得した。胎児の矢状断面Zスキャンでは、三叉神経、動眼神経等の脳神経が、両側とも明瞭に検出されており、胎児全体（2 mm厚程度）のＺスキャンが可能であることが示された。神経線維の走行が明瞭に検出され、神経線維の3次元ネットワーク解析への応用が期待できる。現在、CV7000で高速取得した画像を簡便な操作で3次元像に再構築するためのファイル処理プログラムの作成を行っている。

This study aims to develop the rapid tissue transparency (RAP) method and establish the quantitative analysis method of tissue architecture by toxicity test in recent years. In 2002 and 2004, the RAP-IHC immunostaining and high-speed confocal imaging were used to explore the function of cells. The fetus was born on the 10th day. Primary antibody against Neurofilament antibody, secondary antibody against Alexa fluor 488 anti-mouse IgG After staining, the high refractive index solvent is thorough, and the immunopositive reaction is detected by CV7000. 2 mm in total The sagittal section of the fetus shows that the Z-axis of the whole fetus (about 2 mm thick) is possible. The behavior of the nerve line dimension is clearly detected, and the three-dimensional generation of the nerve line dimension is analyzed. Now, the CV7000 can acquire images at high speed, and it is easy to operate, and the reconstruction of three-dimensional images can be carried out.

项目成果

RAP迅速組織透明化法によるマウス各種臓器の深部組織３Dイメージング

使用RAP快速组织透明化方法对小鼠各器官进行深部组织3D成像

• 发表时间: 2021
• 作者: 坂田ひろみ;増田浩子;友杉充宏;八田稔久
• 通讯作者: 八田稔久

深部イメージングにおける迅速組織透明化法(RAP)の有用性

快速组织透明化 (RAP) 在深度成像中的应用

• 发表时间: 2022
• 作者: 坂田 ひろみ;増田 浩子;友杉 充宏;八田 稔久
• 通讯作者: 八田 稔久

RAP法の免疫組織化学的手法への応用と最適化

RAP方法在免疫组化技术中的应用及优化

• 发表时间: 2022
• 作者: 坂田ひろみ;友杉充宏;酒井大輔;東海林博樹;八田稔久
• 通讯作者: 八田稔久

Hif1α-dependent hypoxia signaling contributes to the survival of deep-layer neurons and cortex formation in a mouse model.

• DOI: 10.1186/s13041-022-00911-0
• 发表时间: 2022-03-31
• 期刊: Molecular brain
• 影响因子: 3.6
• 作者: Sakai D;Sugawara T;Kurokawa T;Murakami Y;Tomosugi M;Masuta H;Sakata-Haga H;Hatta T;Shoji H
• 通讯作者: Shoji H

迅速骨染色法（RAP-B）とその応用

快速骨染色法（RAP-B）及其应用

• 发表时间: 2022
• 作者: 坂田ひろみ;菊地慶彦;面美来;丸山太啓;松村聡美;清水彩加;鈴木絢賀;高原怜亜;友杉充宏;八田稔久
• 通讯作者: 八田稔久