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清酒酵母のウラシル要求性株を用いたイオンビーム育種技術の遺伝子変異点の特性解析

使用清酒酵母尿嘧啶营养缺陷型菌株进行离子束育种技术中基因突变点的表征

基本信息

批准号：
21K12528
负责人：
渡部貴志
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Gunma Prefectural Industrial Technology Center
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K12528/
关键词：
清酒酵母イオンビームウラシル要求性生菌率

项目摘要

きょうかい清酒酵母701号（K701）を用いて、従来の炭素イオンビームの他に、ヘリウム、ネオン、アルゴンのイオンビーム、炭素イオンビームでも表面に与えるエネルギー（LET）が異なるもの2種、そして比較対照のUV照射を行った。その結果、イオン種によって生菌率や5-FOA耐性変異株（＝ウラシル要求性候補株）が得られる効率が異なることが分かった。なお、得られたK701の5-FOA耐性変異株について、ウラシルが含まれていない最少培地で培養を長時間行うと、変異が元に戻るためか増殖してくるものがあるため、5日目までに成育してきた株は、変異が不安定であると考え、除外した。続いて、ウラシル要求性が確認された変異株77株と、親株のK701を用い、バイオフォトレコーダーを用いて増殖性を調べた。2021年度の実験では、YM培地で培養したところ、ウラシル要求性株の最大増殖量が親株より大きく下がっていたことから、YM培地にはウラシルが不足していることが考えられていた。そこで、最少培地にウラシルを添加する量とされている40ppmをYM培地に添加してみたが、K701の増殖速度と増殖量にまで改善する効果は無かった。しかしながら、ウラシル要求性株間で増殖速度に差が認められたため、初期菌体量（OD660）が0.1となるように接種し、OD660が1.0になるまでの時間を調べた。その結果、K701では約8時間でOD660が1.0になったのに対し、全てのウラシル要求性株は、K701よりも増殖に大きな遅延が見られた。UVおよびC220照射によって得られた変異株は、株間の増殖速度の差が少ないのに対し、He50、C320照射の場合は差が大きかった。各種の変異処理方法で取得したウラシル要求性株について、URA3とURA5遺伝子配列を解析したところ、変異が確認されたものが複数得られたので、全ゲノム配列の解析を実施した。

Saccharomyces cerevisiae No. 701 (K701) was used to measure the temperature, temperature, temperature and temperature of Saccharomyces cerevisiae 701 (K701). The temperature, temperature, The results showed that the bacterial growth rate of 5-FOA resistant strains (= phenotypic strains) was higher than that of the control group (P < 0.05). K701-5-FOA-tolerant plants were isolated and cultured in the ground for a long time, and the plants were not stable in 5 days, except in the end. Please confirm that 77 strains, K701 strains and reproductive strains are required to be used. In the year of 2021, the maximum fecundity of the required sex plants, the maximum fecundity of the required strains, the maximum reproductive capacity The minimum cultivation area, the minimum cultivation area, the minimum cultivation area, The difference of colonization rate between sexual plants, the difference of colonization rate between sexual plants, the initial bacterial mass (OD660) of 0.1, and the temperature of OD660 of 1.0 and 1.0, respectively. The results of the test showed that K701 was used for about 8 hours, OD660 was used for 1. 0 cycles, all-round tests were required for strains, and K701 colonies were extended for extended periods of time. When UV and C220 were irradiated, the difference of colonization rate between plants was less than that of C220, and that of He50 and C320 was higher than that of control. All kinds of data processing methods have been used to achieve the requirements of the standard strain, the URA3 URA5 sub-array, the data analysis, the confirmation of the data replication, and the full-scale configuration analysis.