フッ化物抵抗性根面齲蝕関連菌の代謝動態解明のためのトランスクリプトーム解析

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口腔Actinomyces は、ヒトのプラーク細菌において口腔Streptococcus に次いで多く、根面齲蝕病巣からも高頻度で検出されることから、根面齲蝕との関連が注目されている。齲蝕は、主に口腔細菌の糖代謝によって産生される酸に起因するが、Actinomycesの糖代謝経路は代表的な齲蝕関連菌であるStreptococcusとは大きく異なる。Actinomycesは、齲蝕予防剤として世界中で広く利用されているフッ化物に耐性を持つことが明らかとなっているものの、その代謝経路の詳細は不明である。本研究では、口腔Actinomycesの代謝活性に対するフッ化物の効果に着目し、増殖抑制や酸産生抑制作用についてトランスクリプトーム解析による代謝酵素の遺伝子発現量の評価を中心とした代謝メカニズムに関する分析化学的および分子生物学的アプローチによって多角的に解析し、代謝経路の解明と効果的なフッ化物応用法を検討・提案することを目的としたものである。トランスクリプトーム解析を行うため、今年度はRNA抽出の方法について主に検討を行った。RNA抽出の方法には主にビーズにより機械的破砕、酵素による破砕があり、対象とする細菌の種類・懸濁液の種類によって選択する必要がある。酵素法については、細菌によって最適な種類と濃度があり、今後の実験計画の拡張性を考えた場合には現実的ではないと判断した。また、今年度予定していたフッ化物による代謝動態変化の評価のためのサンプル収集については時間的な制約があり来年度行うこととした。