歯周病細菌の脳への移行トレース

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令和4年度は、in vitroで使用する細菌の種類、造影剤の種類や濃度、細菌への造影剤標識方法、MRI撮像用のサンプル作製方法、MRIの撮像方法を検討した。使用する細菌の種類としてはPorphyromonas gingivalis（ATCC 33277）、Aggregatibacter actinomycetemcomitans(ATCC 29522)、Streptcoccs mitis(ATCC 9811)を使用した。造影剤の種類および濃度の検討ではGd系としてプリモビスト、マグネビスト、Mn系としてボースデル、Fe系としてリゾビストを使用し、各造影剤を7.7μmol/L、0.77μmol/L、0.077μmol/L、0.0077μmol/Lの濃度で各細菌に使用した。また、細菌への造影剤標識方法の検討では上記の造影剤の条件下で、造影剤と液体培地の混合液での培養、あるいは、ヒートショックを行った。処理後の各サンプルの菌体はホルマリンにて失活・固定した後、複数回洗浄を行い、加温したアガロース溶液で可及的速やかに均一に懸濁した後、プラスチックサンプル管内で硬化させた。各固形サンプルを配列し、その周囲をさらに寒天で充填させ、MRI撮像用のサンプルとした。作製したサンプルを研究用3T-MRI装置で撮像した。撮像シークエンスは、T2 map、T2*map、マルチエコー3D-T1強調像を用いた。Matlab上で、定量的磁化率マッピング画像（QSM画像）を計算し、各条件において定量値に有意な変化があるかどうかを検討した。以上の結果より、使用する細菌としてはPorphyromonas gingivalis（ATCC 33277）およびStreptcoccs mitis(ATCC 9811)が妥当であり、使用する造影剤としてはFe系であるリゾビストが妥当であると考えられた。