Understanding a mechanism of an onset of colorectal cancer by colibactin and finding compounds inhibiting colibactin biosynthetic enzymes

了解大肠杆菌素引起结直肠癌的机制并寻找抑制大肠杆菌素生物合成酶的化合物

• 批准号: 22H04979
• 负责人: 渡辺 賢二
• 金额: $ 118.39万
• 依托单位: University of Shizuoka
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (S)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-27 至 2027-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22H04979/
• 关键词: コリバクチン; 大腸がん; 遺伝毒性物質; 天然物; 生合成; 大腸菌; がん化学予防法

本研究の目的は大腸がん患者数を減少させることにある。その目的を達成するための方法として、腸内細菌由来大腸がん原因物質コリバクチンが大腸がんを誘起するメカニズムの解明とコリバクチン生産抑制法の考案に取り組んだ。本年度は特にコリバクチンの高感度検出法の確立のためのコリバクチン産生菌に対する抗体の探索について報告する。コリバクチン産生菌に対する抗体の探索コリバクチン産生菌感染の高感度検出法の確立のため、コリバクチン産生菌に特異的なモノクローナル抗体の取得を目指した。まずは我々がヒトの大腸がん組織検体より分離、培養に成功し、既報のコリバクチン産生菌と比較して約30倍もの高産生量を示したコリバクチン産生菌株（E. coli-50と命名、以下#50と表記）に対するモノクローナル抗体を作製した。得られた抗体を用いてスクリーニングを行い、#50に特異的で、高い反応性を持つ抗体を選別した。さらに、これらモノクローナル抗体のコリバクチン産生菌への特異性を様々な大腸菌株に適応することにより検証した。また、得られたモノクローナル抗体のアイソタイプ、CDR配列を決定した。エピトープ決定のためエピトープと推定される繊毛タンパク質の過剰発現株のウエスタンブロッティング、エピトープマッピングを行った。並行して繊毛タンパク質とコリバクチン産生性との関係などさらなる研究につながる#50の繊毛タンパク質のノックアウト株の作製を行った。ELISAによって選択された抗#50抗体が確実に#50を検出することを確認するために、ウエスタンブロッティングで#50抗原の検出を行った。

The objective of this study is to reduce the number of patients with がん in the large intestine を and させる とにある とにある. そ の purpose を reach す る た め の way と し て, intestinal bacteria origin e. が ん reason material コ リ バ ク チ ン が e. が ん を induced す る メ カ ニ ズ ム の interpret と コ リ バ ク チ ン production inhibition method に の test case group take り ん だ. This year は, に コ リ バ ク チ ン の の 検 Gao Gan degrees out method to establish の た め の コ リ バ ク チ ン bacteria produce に す seaborne る antibody の explore に つ い て report す る. コ リ バ ク チ ン bacteria produce に す seaborne る antibody の explore コ リ バ ク チ ン produce bacteria infection の Gao Gan degrees の 検 out the method to establish の た め, コ リ バ ク チ ン produce fungus に special な モ ノ ク ロ ー ナ ル antibodies の を obtain refers し た. ま ず は I 々 が ヒ ト の e. が ん organization 検 body よ り に し success, both were isolated and cultured to の コ リ バ ク チ ン bacteria produce と compare し て about 30 times も の high quantity を shown し た コ リ バ ク チ ン produce strain (e. coli - 50 と naming, sign the following # 50 と submission) に す seaborne る モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody を cropping し た. Have ら れ を た antibody with い て ス ク リ ー ニ ン グ を い, 50 に specific で #, high い anti 応 を hold つ antibody を choose don't し た. さ ら に, こ れ ら モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody の コ リ バ ク チ ン bacteria produce へ の specificity を others 々 な coliform strains に optimum 応 す る こ と に よ り 検 card し た. ま た, ら れ た モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody の ア イ ソ タ イ プ, CDR match column を decided し た.​​ ELISA に よ っ て sentaku さ れ た # 50 antibody resistance が really be に # 50 を 検 out す る こ と を confirm す る た め に, ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ で # 50 antigen の 検 を row っ た.

项目成果

Advancing the Biosynthetic and Chemical Understanding of the Carcinogenic Risk Factor Colibactin and Its Producers

• DOI: 10.1021/acs.biochem.2c00229
• 发表时间: 2022-06-20
• 期刊: BIOCHEMISTRY
• 影响因子: 2.9
• 作者: Hirayama, Yuichiro;Sato, Michio;Watanabe, Kenji
• 通讯作者: Watanabe, Kenji

静岡県立大学 薬学研究院 生薬・天然物化学研究室

静冈县立大学药学部草药与天然产物化学实验室

Cytotoxic Homo- and Hetero-Dimers of o-toluidine, o-anisidine, and Aniline Formed by In Vitro Metabolism

体外代谢形成的邻甲苯胺、邻茴香胺和苯胺的细胞毒性同二聚体和异二聚体

• DOI: 10.1021/acs.chemrestox.2c00226
• 发表时间: 2022
• 期刊: Chemical Research in Toxicology
• 影响因子: 4.1
• 作者: Kobayashi Takuma;Kishimoto Shinji;Watanabe Shogo;Yoshioka Yasukiyo;Toyoda Takeshi;Ogawa Kumiko;Watanabe Kenji;Totsuka Yukari;Wakabayashi Keiji;Miyoshi Noriyuki
• 通讯作者: Miyoshi Noriyuki

ClbP特異阻害剤のスクリーニング法

ClbP特异性抑制剂的筛选方法

• 发表时间: 2023
• 作者: 周 韜;佐藤 道大;渡辺 賢二
• 通讯作者: 渡辺 賢二

コリバクチン産生大腸菌結合性抗体

产生 Colibactin 的大肠杆菌结合抗体

• 发表时间: 2023