In vivo-regulation of DNA-topoisomerase II isoenzymes by interacting proteins

相互作用蛋白对 DNA 拓扑异构酶 II 同工酶的体内调节

• 批准号: 55805511
• 负责人: Dr. Morten Overby Christensen
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Klinische Chemie und Laboratoriumsdiagnostik
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2006-12-31 至 2010-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/55805511?language=en
• 关键词: vivo; regulation; DNA; topoisomerase; II

Topoisomerase II beseitigt Verwindungen der DNS Doppelhelix, die z.B. bei der Replikation und Chromosomentrennung entstehen. In Vertebraten existieren zwei genetisch unterschiedliche Isoenzyme mit ähnlichen in vitro-Aktivitäten, aber unterschiedlichen biologischen Rollen. Die α-Form kommt nur in proliferierenden Zellen vor und ist essentiell für die Zellteilung. Die β-Form ist ubiquitär, kann jedoch die Zellteilung nicht unterstützen. Wir haben gezeigt, dass isoform-spezifische Funktionen mit der C-terminalen Enzymregion von der α- auf die β-Form übertragen werden können. Da diese Enzymregionen für die katalytische Aktivität jedoch entbehrlich sind, ist es am wahrscheinlichsten, dass sie ihre Fähigkeit, isoform-spezifische Funktionen zu vermitteln, durch hier angreifende Bindungsproteine erlangen. Wir wollen solche Proteine, die mit der einen oder anderen Isoform interagieren, identifizieren und charakterisieren. Durch Austausch bzw. Deletion von Fragmenten der C-terminalen Regionen werden wir die minimalen regulatorischen Domänen eingrenzen und durch Tandem-Affinitäts-Reinigung und Massenspektroskopie Interaktionsproteine dieser Domänen identifizieren. Dann werden wir mittels einer “phage display”- Bibliothek Peptidsequenzen identifizieren, die diesen Proteinwechselwirkungen zugrunde liegen. Proteininteraktionen, die solchermaßen als Kandidaten isoformspezifischer Regulationsvorgänge eingegrenzt sind, werden durch den Förster-Effekt in vivo sichtbar gemacht und ihre funktionelle Relevanz wird mittels kompetitiver Peptidblockade nachgewiesen.

拓扑异构酶II适用于双螺旋DNA，复制和染色质地。在脊椎动物现有的Zwei基因中，未融合的地衣同工酶MITähnlichen在试管内为Aktiitäten，而在未融合的地衣中则为Rollen。Dieα-Form kommt Nur in upplierenden zellen vor and ist essentiell für die Zellteilung.Dieβ-Form ist Ubiquitär，Kann Jedoch die Zellteilung Net it Unterstützen.我们在α-auf dieβ-formübertragen-Formübertragen-Formübertragen With können中实现了C终止区。这是一种新的技术，它是一种新的技术，它是一种新的技术，是一种新的技术，是一种新技术。我们以蛋白质、蛋白质和同种异构体相互作用，鉴定和鉴定。删除C-末端区域中的von Fragmenten是最低限度的调节者，并通过串联-Affinitäts-Reinigung and MassenSpektroskopie InteraktionsProtein Dieser Domänen识别。丹恩是我们的拳击手套眼镜蛇“噬菌体展示”-书目多肽序列识别，并与我们的蛋白质我们自己的工作运行运行的liegen。Proteininteraktionen，die solchermaçen als Kandidaten Iform Spezifischer Regulationsvorgänge eingegrenzt sind，wird mittels komplittiver Peptid封锁nachgewiesen.