創薬研究のための昆虫抽出液バイオリアクターを用いた新規ペプチド合成システムの開発

使用昆虫提取物生物反应器开发新型肽合成系统用于药物发现研究

基本信息

  • 批准号:
    22K04849
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.75万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    2022
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2022-04-01 至 2025-03-31
  • 项目状态:
    未结题

项目摘要

感染症等の治療薬開発に向けてペプチド創薬研究が活発化している。しかし、研究に用いる高分子量のペプチド合成において、固相合成等化学的方法では迅速化やスケールアップが難しく、組換え大腸菌ではジスルフィド結合が形成できない等の不具合があり、研究推進の障壁となっている。そのため、本研究では、我々が発案・実用化した昆虫無細胞タンパク質合成系を基盤とし、昆虫抽出液をバイオリアクターとして用いた新規ペプチド合成システムを開発し、「ペプチド創薬研究に活用できる技術」に創りあげることを目的とする。初年度となる2022年度では、低分子タンパク質に相当するいずれも抗菌性を有する170アミノ酸残基のHuman cathelicidin(LL-37, 19 kDa)、 94アミノ酸残基のHuman defensin 5(α-Defensin-5, 10kDa) を用いて合成系および評価系の構築を行った。C末端にStrep-tagⅡ配列を導入したLL-37、およびα-Defensin-5発現プラスミドを鋳型として、mRNA合成キットを用いてmRNAを合成した。合成したmRNAにカイコ後部絹糸腺抽出液、リアクションバッファを加えて、25℃、5時間、合成を行った。その後、反応液を用いてウエスタンブロット解析を行った。その結果、LL-37およびα-Defensin-5は、どちらも想定される分子量の21kDaおよび12kDa付近(遺伝子+スペーサー+Strep tag IIのため)に特異的なバンドとして検出することができた。これにより、本年度の目標を達成することができた。2023度以降は、構築した評価系と分子量の異なる低分子タンパク質およびペプチド5種程度を用い、合成条件等を最適化することで、100 μg/ml 以上の効率で機能性を有するペプチドの合成を実現する。
The development of infectious disease and other therapeutic drugs に towards けてペプチド creative drug research が activation of <s:1> る る る る. し か し, research に い る high molecular weight の ペ プ チ ド synthetic に お い て, solid phase synthesis of the chemical methods such as で は quickly turn や ス ケ ー ル ア ッ プ が difficult し く, group in え coliform で は ジ ス ル フ ィ ド combined が form で き な い etc. の not close が あ り, research advance の barrier と な っ て い る. そ の た め, this study で は, I 々 が 発 case, be in turn し た insect cell free タ ン パ ク qualitative GeChengXi を base plate と し, insects, extract を バ イ オ リ ア ク タ ー と し て in い た new rules ペ プ チ ド synthetic シ ス テ ム を open 発 し, "ペ プ チ ド gen 薬 research に transfer で き る technology" に gen り あ げ る こ と を purpose と す る. Early annual と な る 2022 で は, low molecular タ ン パ ク qualitative に quite す る い ず れ も antimicrobial properties を have す る 170 ア ミ ノ acid residues の Human cathelicidin (LL to 37, 19 kDa), 94ア, ア, ノ, acid residue <s:1> Human defensin 5(α-Defensin-5, 10kDa) を, 価 series <s:1> construction を line った using <s:1> て synthetic series および. C terminal に Strep - tag Ⅱ match column を import し た LL to 37, お よ び alpha Defensin - 5 発 now プ ラ ス ミ ド を type where と し て, mRNA synthesis キ ッ ト を with い て mRNA を synthetic し た. Synthetic し た mRNA に カ イ コ posterior silk si gland extract, リ ア ク シ ョ ン バ ッ フ ァ を plus え て, 25 ℃, 5 time line, synthetic を っ た. After そ そ, reverse the 応 solution を and use the そ てウエスタ てウエスタ ブロット ブロット to displace the を line った. そ の results, LL to 37 お よ び alpha Defensin - 5 は, ど ち ら も scenarios さ れ る の molecular weight 21 kda お よ び pay nearly 12 kda (legacy 伝 child + ス ペ ー サ ー + Strep tag II の た め) に specific な バ ン ド と し て 検 out す る こ と が で き た. Youdaoplaceholder0 れによ れによ, achieve the を target of this year を とがで とがで た た. 2023 degrees to fall は, constructing し た review 価 department と の different molecular weight な る low molecular タ ン パ ク qualitative お よ び ペ プ チ ド five degree を い, optimal synthetic conditions を す る こ と で, more than 100 mu g/ml の sharper rate で functional を have す る ペ プ チ ド の synthetic を be presently す る.

项目成果

期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Inhibition of α-glucosidase by Morus australis fruit food
桑果食品对α-葡萄糖苷酶的抑制作用
  • DOI:
  • 发表时间:
    2023
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    So Nishimoto;Yuki Ikeda;Ying Qiao;Hideaki Minami;Masaaki Ito;Toshiyuki Kimura;Teisuke Takita;Kiyoshi Yasukawa
  • 通讯作者:
    Kiyoshi Yasukawa
バイオプロセスを用いた有用性物質生産技術 第7章 第7節 カイコ無細胞系を用いたタンパク質生産と分離技術 504-510
利用生物过程的有用物质生产技术第7章第7节利用蚕无细胞系统的蛋白质生产和分离技术504-510
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Yoshiki Niihori;Sayuri Miyajima;Ayaka Ikeda;Taiga Kosaka;Yuichi Negishi;伊東昌章
  • 通讯作者:
    伊東昌章
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伊東 昌章其他文献

カイコ幼虫後部絹糸腺由来無細胞タンパク質合成系における翻訳促進配列の機能解析
家蚕幼虫后丝腺无细胞蛋白质合成系统中翻译促进序列的功能分析
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    佐事 武;尾山 廣;伊東 昌章
  • 通讯作者:
    伊東 昌章

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相似海外基金

Construction of highly efficient completely cell-free protein synthesis system using insect extract
利用昆虫提取物构建高效完全无细胞蛋白质合成体系
  • 批准号:
    19K05176
  • 财政年份:
    2019
  • 资助金额:
    $ 2.75万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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