Study on naturally-occurring peptides potentiating amphotericin B activity

ネクトリアチドは微生物資源より見出されたアムホテリシンB（AmB）の抗真菌活性を増強する新規環状ペプチドである。ネクトリアチドは単独では抗真菌活性を示さないため、その併用はAmBの抗真菌活性を維持したまま、投与量を削減し、その結果として副作用を減弱すると期待されている。研究代表者はすでに確立した液相合成を活用して誘導体を合成した。その中でC末、N末、チロシンの残基を保護した鎖状誘導体が1.0 μg/mLの濃度でAmBのMIC値を1.0 μg/mLから0.063 μg/mLまで低下させAmB活性を16倍増強し、ネクトリアチドより高活性を示すことを見出した。この鎖状誘導体をリード化合物に取り上げて、プローブ分子としてビオチン体の合成を検討した。N末の保護基を選択的に除去する方法を見出し、続いてN末にNヒドロキシスクシイミドPEGビオチンを利用して、N末にビオチンを導入したプローブ分子を合成した。CLSI M27-A3法およびM-38-A2法に準じて、微量液体希釈法により酵母Candida albicans ATCC90029株に対するMICを測定し、またAMPB活性増強作用についてはAmBと化合物を併用した時の真菌に対するMIC値を測定した。プローブ分子は鎖状誘導体より低活性であったが、ネクトリアチドと同程度の活性を示した。続いて、AmBはエルゴステロールに結合することから、ネクトリアチドも脂質分子と相互作用するのではと仮定し、合成したプローブ分子を用いて脂質結合アッセイを行なった。ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノール、ホスファチジルイノシトール、エルゴステロール、コレステロールを評価した。その結果、ネクトリアチドはエルゴステロールと強い親和結合性を示した。

ネクトリアチドは微生物資源より見出されたアムホテリシンB（AmB）の抗真菌活性を増強する新規環状ペプチドである。ネクトリアチドは単独では抗真菌活性を示さないため、その併用はAmBの抗真菌活性を維持したまま、投与量を削減し、その結果として副作用を減弱すると期待されている。研究代表者はすでに確立した液相合成を活用して誘導体を合成した。その中でC末、N末、チロシンの残基を保護した鎖状誘導体が1.0 μg/mLの濃度でAmBのMIC値を1.0 μg/mLから0.063 μg/mLまで低下させAmB活性を16倍増強し、ネクトリアチドより高活性を示すことを見出した。この鎖状誘導体をリード化合物に取り上げて、プローブ分子としてビオチン体の合成を検討した。N末の保護基を選択的に除去する方法を見出し、続いてN末にNヒドロキシスクシイミドPEGビオチンを利用して、N末にビオチンを導入したプローブ分子を合成した。CLSI M27-A3法およびM-38-A2法に準じて、微量液体希釈法により酵母Candida albicans ATCC90029株に対するMICを測定し、またAMPB活性増強作用についてはAmBと化合物を併用した時の真菌に対するMIC値を測定した。プローブ分子は鎖状誘導体より低活性であったが、ネクトリアチドと同程度の活性を示した。続いて、AmBはエルゴステロールに結合することから、ネクトリアチドも脂質分子と相互作用するのではと仮定し、合成したプローブ分子を用いて脂質結合アッセイを行なった。ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノール、ホスファチジルイノシトール、エルゴステロール、コレステロールを評価した。その結果、ネクトリアチドはエルゴステロールと強い親和結合性を示した。