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Identification and molecular function of novel acetylcholine receptor gene in plants

植物新型乙酰胆碱受体基因的鉴定及其分子功能

基本信息

批准号：
22K05445
负责人：
山本紘輔
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

RI標識したAChRリガンドである[125I]αブンガロトキシン([125I]αBgt)を用いて、リガンドに対して高い結合能を有する植物を選定した。結果として、レモンバーム根の細胞膜画分がリガンドに対して高い結合能を有していた。次に以下の方法で植物AChR様タンパク質の分離を試みた。方法1: 光親和性標識[125I] αブンガロトキシン(αBgt)を上記細胞膜画分と反応させ、光架橋した。光架橋した試料を電気泳動することでRI標識リガンドが結合したAChR様タンパク質をゲル上で検出した。その結果、約60kDaにバンドが検出された。同様な工程をRI標識していないαBgtを使用して行い、電気泳動後に上記AChR様タンパク質が検出された分子量(約60kDa)と同位置のゲルを回収した。方法2：レモンバーム根の細胞膜画分を界面活性剤で可溶化し、リガンド固定化アフィニティーカラムにより植物AChR候補タンパク質群を部分精製した。対照区としてリガンドが結合していないカラムにより試料を分離し、非特異吸着タンパク質群を得た。上記2試料を電気泳動に供試し、バンドパターンを比較することで、AChR候補タンパク質群に特異的なバンドを回収した。方法1と同様に、60kDa付近にAChR候補タンパク質群に特異的なバンドを検出することができた。

The RI header is known as [125i] α-BGT ([125i] α-BGT), which can be used to combine the high-level information of AChR and other plants. Results the results showed that there were significant differences in cell membrane painting between the two groups. The following methods are used to separate the plants from AChR. Method 1: light and sex markers [125i] α Bgt were divided into two parts: anti-membrane painting and light frame painting. In the light frame, the electrophoretic equipment, the electrophoretic swimming, the RI identification, the identification, the identification, The result of the test, which is about 60kDa, will result in a bad result. The same engineering RI tag was used to determine the molecular weight (about 60kDa) in the same position as that in the same location using the same AChR after the electronic swimming exercise. Method 2: the activity of the interface of cell membrane painting, soluble, immobilized, immobilized and immobilized. In the light area, the system is used to separate the materials, and the non-specific inhalation system is used to separate the materials. In the last two days, the electrophoretic swimming exercise is used for the test, and the AChR waiting time is available for the special users of the group. Method 1. 60kDa paid close to the special group of AChR candidates for the same period of time.