酵母におけるプロテインキナーゼCによるTORC2シグナルの負の制御

酵母中蛋白激酶 C 对 TORC2 信号传导的负调控

• 批准号: 22K05559
• 负责人: 野村 亘
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K05559/
• 关键词: TORC2; yeast; シグナル伝達; Pkc1; edelfosine; PKC

TOR（Target Of Rapamycin）は、酵母からヒトに至るまで進化上高度に保存されたタンパク質リン酸化酵素であり、細胞の成長や代謝に必須なシグナル伝達経路を構成する。出芽酵母Saccharomyces cerevisiaeにおいて、TORが形成する複合体の一つであるTOR複合体2（TORC2）は、基質であるYpk1および Ypk2のリン酸化制御を通してスフィンゴ脂質生合成の調節に寄与する。TORC2-Ypk1/2シグナルは、機械的な細胞膜刺激やスフィンゴ脂質生合成の阻害などに起因する細胞膜ストレスにより活性化されるが、TORC2-Ypk1/2シグナル活性化の制御機構については不明な部分が多い。我々はこれまでに、ステロールとの親和性を有する合成脂質edelfosineが細胞膜ストレスによるTORC2-Ypk1/2シグナルの活性化を阻害すること、ならびにその阻害機構にCWI（Cell Wall Integrity）経路の構成因子であるPkc1が関与することを見出した。しかしながら、Pkc1によるTORC2-Ypk1/2シグナルの負の制御機構の詳細は未だ明らかではない。本年度は、Pkc1の細胞内局在性に着目し、Pkc1-GFPを用いてedelfosineがPkc1の細胞内局在に及ぼす影響について検討した。対数増殖期の細胞では、Pkc1-GFPの局在は主にbud tipやbud neckに観察されるが、edelfosineを培地に添加することでbud tipやbud neck以外の母細胞を含めた細胞膜直下にもその局在が観察されるようになることを見出した。一方、TORC2は細胞膜直下にドット状に局在することがわかっているが、TORC2の細胞内局在性に対してedelfosineの大きな影響は認められなかった。

TOR (Target Of Rapamycin) is a highly conserved enzyme that is essential for cell growth and metabolism. The regulation of lipid biosynthesis in Saccharomyces cerevisiae by TOR complex 2 (TORC2) and substrate Ypk1 and Ypk2 TORC2-Ypk1/2 is a mechanism for mechanical cell membrane stimulation and inhibition of lipid biosynthesis. The mechanism for activation of TORC2-Ypk1/2 is unknown. We found that synthetic lipid edelfosine has affinity for cell membrane structure, TORC2-Ypk1/2, and its activity is inhibited by Cell Wall Integrity (CWI). Pkc1 TORC2-Ypk1/2 Details of the negative control mechanism are not available. This year, Pkc1 intracellular localization, Pkc1-GFP application, edelfosine, Pkc1 intracellular localization and its effects were investigated. In addition to the bud tip and bud neck, Pkc1-GFP was detected in the mother cells during the growth period. The cell membrane of TORC2 is directly under the central position of the cell membrane, and the intracellular central position of TORC2 is directly under the central position of the cell membrane.

项目成果

Roles of phosphatidylserine and phospholipase C in the activation of TOR complex 2 signaling in <i>Saccharomyces cerevisiae</i>

磷脂酰丝氨酸和磷脂酶 C 在酿酒酵母 TOR 复合物 2 信号传导激活中的作用

• DOI: 10.1242/jcs.259988
• 发表时间: 2022
• 期刊: Journal of Cell Science
• 影响因子: 4
• 作者: Nomura Wataru;Ng Su-Ping;Takahara Terunao;Maeda Tatsuya;Kawada Teruo;Goto Tsuyoshi;Inoue Yoshiharu
• 通讯作者: Inoue Yoshiharu

合成脂質edelfosineを用いた酵母TORC2シグナルの制御機構解析

合成脂质埃德福辛分析酵母TORC2信号的控制机制

• 发表时间: 2023
• 作者: 野村 亘;井上善晴
• 通讯作者: 井上善晴