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多様なエピジェネティック制御を可能にするイネDNA脱メチル化酵素基質選択性の理解

了解水稻 DNA 去甲基酶底物选择性，实现多种表观遗传调控

基本信息

批准号：
22K05575
负责人：
小野明美
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

DNAメチル化やヒストン修飾などに代表されるエピジェネティックなゲノムの制御機構は、生命現象を多面的に支える。穀物の胚乳も、多様なエピジェネティック制御によってその発生や機能が担保される。本研究課題は、『イネに存在する複数のDNA脱メチル化酵素のそれぞれの特性が、イネ胚乳におけるエピジェネティック制御の多様な作用の一端を担う』という仮説のもと、個々のDNA脱メチル化酵素の基質の選択性や分子パーツを比較し掘り下げることで、多様なエピジェネティック制御を可能にする分子機構を理解していくことを目指している。具体的には３つのアプローチを計画し実施している。①DNA脱メチル化酵素の機能の相補性を精査する：DNA脱メチル化酵素それぞれの変異体の固有の表現型・基質選択性を他のDNA脱メチル化酵素がどこまで相補できるのか？②基質選択性の根拠となる分子機構にアプローチする：それぞれのDNA脱メチル化酵素と相互作用する因子は何か？③酵素特異的な選択を受けることが示唆される基質領域について解像度を上げて解析する：高度反復配列に酵素特異的なDNAメチル化を検出できるか？令和４年度は、①について、表現型の顕著なOsROS1aの変異体を背景に、他のDNA脱メチル化酵素での相補を確認するための植物体を、交配により作出した。まず表現型に着目した遺伝学的な解析を行った。②それぞれのDNA脱メチル化酵素にtagを付加した構造の遺伝子を導入したイネを作成し、植物体で目的のタンパクが発現していることを確認した。付加したtagを利用した免疫沈降によりDNA脱メチル化酵素と相互作用する因子を探索するための各種条件検討を、これらの植物体を用いて行った。③基質領域の精査にむけて、DNAメチル化検出の解像度を上げるための試みの１つとして、Enzymatic Methyl-seqを行い、その汎用性と解像度について検討した。

The DNA information system is designed to represent the control of the machine, and the life is like a multi-faceted one. The endosperm of the plant, the endosperm, the endosperm and the endosperm. In the subject of this study, "there is a sequence of complex DNA enzymes, endosperm enzymes, enzymes, endosperm enzymes, enzymes It is possible that the molecular mechanism may understand that the system is intended to indicate that it is necessary to do so. The details of the project are as follows: the details of the plan. The mechanism of 1DNA desquamation enzyme enzyme is sensitive to DNA enzyme enzyme. The intrinsic gene type of the enzyme is selective. DNA enzyme enzyme is sensitive to the enzyme phase. (2) the molecular mechanism of the selective radical mechanism has a direct effect on the molecular mechanism: what is the effect of the enzyme interaction factor on DNA removal? (3) the selection of enzyme characteristics is instigated by the analysis of the resolution in the field of the enzyme: a high degree of anti-alignment of the enzyme in DNA. Ling and 4 years old, 1-year-old, table-type, OsROS1a, body, background, DNA, enzyme, enzyme, plant, mating, body, body and body. The table type focuses on the analysis of the lines that you have learned. 2. After DNA removal, the enzyme tag was added to make the enzyme. The plant was made by adding the enzyme to the plant. Fujia tag was used to explore various conditions by immunoprecipitation, enzyme interaction and enzyme interaction factors for DNA removal. (3) in the field of precision, DNA measurement results show that the resolution is different in terms of resolution, Enzymatic Methyl-seq, and usability.